[发明专利]泌尿系统真菌感染检测体系及其试剂盒和应用在审
申请号: | 202110380677.2 | 申请日: | 2021-02-07 |
公开(公告)号: | CN112941215A | 公开(公告)日: | 2021-06-11 |
发明(设计)人: | 赵虎;张艳梅;南丽 | 申请(专利权)人: | 华东医院;宁波海尔施基因科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12N15/11 |
代理公司: | 上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙) 31258 | 代理人: | 任益 |
地址: | 200040 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 泌尿系统 真菌 感染 检测 体系 及其 试剂盒 应用 | ||
1.一种泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:包括分别针对白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、进行检测的正反向引物,检测样本为尿液。
2.根据权利要求1所述的泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:针对白色念珠菌的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.21所示,针对白色念珠菌的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.22所示;
针对热带念珠菌的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.23所示,针对热带念珠菌的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.24所示;
针对光滑念珠菌的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.25所示,针对光滑念珠菌的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.26所示。
3.根据权利要求2所述的泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:还包括针对人DNA内参进行检测的正反向引物和针对系统质控内参进行检测的正反向引物;针对人DNA内参的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示,针对人DNA内参的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示;针对系统质控内参的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.39所示,以及针对系统质控内参的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.40所示。
4.根据权利要求3所述的泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:针对人DNA内参和系统质控内参的正向引物在检测体系中的终浓度均为200nM;针对人DNA内参和系统质控内参的反向引物在检测体系中的终浓度均为200nM;针对白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌的正向引物在检测体系中的终浓度均为400nM;针对白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌的反向引物在检测体系中的终浓度均为400nM。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:还包括多重PCR预混液、多重PCR酶液和无核酸酶纯水;所述多重PCR预混液由10×PCR缓冲液、MgCl2和dNTPs混合而成;所述多重PCR酶液由热启动DNA聚合酶和UNG酶混合而成。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:所有正向引物上设有荧光标记,所述荧光标记为CY5或CY3或FAM。
7.根据权利要求1至4中任一项所述的泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:还包括阳性对照物和阴性对照物;所述阳性对照物是包括所有目的基因靶点的质粒混合物;所述阴性对照物是无核酸酶超纯水。
8.根据权利要求5所述的泌尿系统真菌感染检测体系,其特征在于:反应时体系中的组分用量为10×的PCR缓冲液1体积,10μM的dNTPs共0.2体积,25mmol/L的MgCl2溶液0.8体积,引物混合物1体积,5U/μL的热启动DNA聚合酶0.4体积,1U/μL的UNG酶0.5体积,DNA模板5体积,无核酸酶纯水1.1体积;所述DNA模板的使用量为5~50ng/体系。
9.一种包括如权利要求1所述的检测体系的泌尿系统真菌感染检测试剂盒。
10.一种采用如权利要求1所述的检测体系制备泌尿系统真菌感染检测和诊断产品的应用。
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