[发明专利]一种利用四叶参叶片快速繁殖种苗的方法

说明书

本发明属于植物组培技术领域，涉及一种利用四叶参叶片快速繁殖种苗的方法，包括叶片诱导分化不定芽、不定芽增殖、壮苗、生根诱导、移栽和管理过程。本发明工艺流程简单，以四叶参叶片为外植体直接诱导分化不定芽，不定芽继代增殖形成丛芽、壮苗、不定芽生根、移栽等过程，可在短时间内获得大量可用于生产栽培的种苗，且获得的种苗生理年龄一致，生长整齐，满足市场对四叶参优良种苗的需求，适合工厂化育苗和规模化栽培，为四叶参繁育和产业化生产奠定基础。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，涉及一种四叶参种苗繁育方法，具体涉及一种利用四叶参叶片快速繁殖种苗的方法。该方法利用四叶参叶片直接诱导分化不定芽，通过不定芽继代增殖、壮苗、生根诱导、移栽等过程，获得大量种苗。

背景技术

四叶参(Codonopsis lanceolata Benth.et Hook.F.)又名泰山参、轮叶党参、羊乳、奶参等，为桔梗科党参属植物，为草质缠绕藤本，全株有白色液汁，野生于山坡林缘、疏林灌丛及溪谷间。据《泰山药物志》记载，四叶参被列为“古有今无之特产”，为泰山四大名药之一。既是药食兼用的经济植物，也是著名的滋补药材，具有清热解毒、补虚通乳、舒筋活血、健身补气等功效，主要用于气虚体虚，气阴不足，自汗口渴，肺燥干咳等症的治疗。分布东北及河北、山西、山东、河南、安徽、江西、湖北、江苏、浙江、福建、广西等地。其深加工产品作为药膳、保健品、饮品已经进入市场，受到广泛关注，市场需求不断增加。由于长期的滥采乱挖，野生四叶参资源正逐渐减少。为保护四叶参野生资源并满足市场需求，发展人工栽培已成必然。

四叶参通常用种子繁殖。但种子萌芽需要的时间较长，也容易发生分离变异，不利于优良品种的推广及种苗快速繁育。植物组织培养具有原材料需求量少、不受时间和地点限制、繁殖系数高、可保持母本优良性状等特点，在植物种苗繁育上广泛应用。

有关四叶参组织培养技术研究的鲜见报道。李铁军等人采用泰山四叶参的含芽茎尖、茎段等不同外植体，考察了泰山四叶参的最佳组织培养条件，对比了愈伤组织途径和含芽茎尖、茎段诱导丛生芽的效果，研究结果表明，茎段和茎尖诱导的效果都不理想。带芽茎段诱导的分化率极低，且生长缓慢，单苗切分后继代培养，生长缓慢，甚至不长，死亡率较高；利用茎尖诱导则形成球形菜花状愈伤组织，且诱导率也只有20％。为了解决四叶参种苗的规模化生产，满足市场对四叶参优良种苗的需求，有必要建立能大量、快速繁殖四叶参种苗的生产技术体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用四叶参叶片快速繁殖种苗的方法，通过四叶参叶片诱导直接分化不定芽，不定芽增殖、壮苗、生根、移栽等过程，可在短时间内获得大量可用于生产栽培的种苗。该方法获得的种苗性状一致，生长整齐，适合工厂化育苗和规模化栽培。

本发明所采用的技术方案：

一种利用四叶参叶片快速繁殖种苗的方法，包括叶片诱导分化不定芽、不定芽增殖、壮苗、生根诱导、移栽和管理过程，其步骤如下：

1、叶片诱导分化不定芽过程

取幼嫩的四叶参叶片，清洗消毒后接种于诱导培养基上诱导分化不定芽；将分化的不定芽切成小块接种于新鲜的诱导培养基上进行继代增殖培养。所述诱导培养基是以MS为基础培养基，并添加6-BA 0.5～3.0mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L，pH为5.8。

所述四叶参叶片是切成小块或整片接种于诱导培养基上。

所述四叶参叶片的切块方式是沿与叶脉垂直方向切块。

2、壮苗培养过程

把继代增殖后的不定芽丛芽切割成小丛转接到壮苗培养基上进行壮苗培养。所述壮苗培养基是以MS为基础培养基，并添加6-BA 0.1～0.5mg/L、NAA 0.02～0.5mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L、多肽3ml/L，pH为5.8。

3、生根诱导过程