[发明专利]抗TdT蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人TdT抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取TdT蛋白C末端的1‑150位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21(DE3)表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含TdT蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗TdT蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株32D5,以及由该细胞株所分泌的抗TdT蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达TdT蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗TdT蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)是细胞核内的一种酶，为无须模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到DNA分子3’-OH端。TdT分子量为32000道尔顿，由α和β两个肽链构成，后两者分子量分别为8000道尔顿和24000道尔顿。

TdT基因位于人染色体10q23-q24，位于鼠染色体19。TdT有多方面的功能，其主要功能有：TdT可以作为一种无须模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到DNA分子3’-OH端，例如利用外源末端脱氧核苷酸转移酶对DNA链断裂的3’-OH末端进行荧光标记；MoteaE A等研究发现：在抗体基因重排期间，TdT可将核糖核苷酸加入到T细胞受体和B细胞受体V、D和J的外显子区；正常情况下TDT可在胸腺组织中表达，也可在儿童及年轻人的扁桃体、淋巴结中少量表达。

TdT在淋巴造血系统肿瘤的诊断中具有重要的意义，其在急性髓系白血病的肿瘤细胞中阴性表达，而在急性淋巴细胞白血病的肿瘤细胞中阳性表达，可作为鉴别急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病的标志物。此外，TdT可表达于幼稚的T淋巴细胞和B淋巴细胞，在T淋巴母细胞淋巴瘤和B淋巴母细胞淋巴瘤中表达，常用于胸腺瘤和T、B淋巴母细胞淋巴瘤的病理诊断中。

此外，TdT还可在多种肿瘤中表达，包括皮脂腺肿瘤、神经内分泌肿瘤和泌尿系统肿瘤等。Buresh CJ等研究发现，TdT可在Merkel细胞癌中表达，其阳性率为73％。Sidiropoulos M等研究发现，TdT在Merkel细胞癌中阳性率为70％(28/40)，其中25％为中等强度阳性，而在小细胞肺癌中阳性率仅为7％(2/30)。Kolhe R等研究发现，TdT在Merkel细胞癌和小细胞肺癌中表达的阳性率分别为78％(21/27)和90％(9/10)。Brobeil A等研究发现，在10例精原细胞肿瘤中TdT均阳性(呈中等至强阳性)。

发明内容

发明人提供了一种抗TdT蛋白单克隆抗体，由保藏号为CGMCC NO 20777的杂交瘤细胞株产生。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别TdT蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG_2b亚型单克隆抗体。

发明人又提供了一种抗TdT蛋白单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含TdT蛋白片段及组氨酸蛋白标签。

进一步地，所述TdT蛋白片段为TdT蛋白的第1位至第150位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。