[发明专利]一种氨基酸的分离提纯方法

说明书

本发明公开了一种氨基酸的分离提纯方法，所述方法包括如下步骤：将水和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相A；将乙腈和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相B；注入氨基酸溶液，以流动相A和流动相B对色谱柱进行梯度洗脱，洗脱完成后记录色谱图，并采用面积归一化法计算氨基酸的纯度，该方法，检测速度与现有技术相比更加快，结果更准确，方法步骤简单，便于操作，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及氨基酸的提纯技术领域，具体涉及一种氨基酸的分离提纯方法。

背景技术：

L-亮氨酸(L-Leucine)是人体必须的八种氨基酸之一，属于二十种蛋白质氨基酸内的脂肪族类氨基酸，与L-异亮氨酸和L-缬氨酸共称三大支链氨基酸，化学式为C₆H₁₃NO₂，与D-亮氨酸是对映异构体，室温下为白色有光泽六面体结晶或白色结晶性粉末。无臭，略有苦味。在烃类存在下，在无机酸水溶液中性能稳定。微溶于乙醇(0.07％)，溶于稀盐酸和碱性氢氧化物和碳酸盐溶液。不溶于乙醚。

亮氨酸与异亮氨酸是同系的同分异构体，结构上亮氨酸与异亮氨酸的碳主链相同，前者的γ位有个甲基，后者β位有个甲基。亮氨酸与异亮氨酸是结构差异很小的同分异构体氨基酸。因此Fmoc-Leu-OH的有关物质之一Fmoc-Ile-OH分离难度尤其大。

如中国专利ZL201310325212.2公开了一种反相分离衍生化亮氨酸和异亮氨酸的方法，在该专利中虽然样品能够分离，但Fmoc-Leu-OH与Fmoc-Ile-OH出峰时间均在40分钟左右，色谱分析时间长，且分离度小于1.5。

发明内容

本发明的目的在于提供一种氨基酸的分离提纯方法，以解决现有技术中氨基酸分离时出峰时间长，且分离度低的缺陷。

一种氨基酸的分离提纯方法，所述方法包括如下步骤：

将水和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相A；

将乙腈和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相B；

注入氨基酸溶液，以流动相A和流动相B对色谱柱进行梯度洗脱，洗脱条件为：

0min，流动相B的体积变化为40～100；

20min，流动相B的体积变化为40～100；

25min，流动相B的体积变化为80～100；

29min，流动相B的体积变化为80～100；

30min，流动相B的体积变化为40～100；

35min，流动相B的体积为40～100；

记录色谱图，并采用面积归一化法计算氨基酸的纯度。

进一步的，所述氨基酸溶液包括Fmoc-Leu-OH的混合溶液或Fmoc-Ile-OH的混合溶液中的一种或两种混合的溶液。

进一步的，所述0.1％TFA的离子对溶液的体积含量为0.05～1.2％、乙腈的体积含量为20～90％，水的体积含量为体积含量为10～80％。

进一步的，所述色谱柱包括C4色谱柱、C12色谱柱以及C18色谱柱中的一种。

进一步的，洗脱时的色谱柱的柱温为22～45℃。

进一步的，洗脱的进样浓度控制在0.4～1.0mg/min。

进一步的，洗脱时紫外线检测器的检测波长为210～280nm。

进一步的，洗脱时流动相流速为0.6～1.2ml/min。