[发明专利]正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺

权利要求书

1.正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤:

1)材料制备，选取菌株，选取活性1254菌株酵母进行培育；

2)制备培养基，选取斜面培养基，然后在培养基的内部添加葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、琼脂和麦芽汁等；

3)突变照射，将步骤1)中选取的活性1254菌株通过紫外线诱导照射，制得突变的酵母菌株；

4)然后将步骤3)中获取的突变的酵母菌株，移植至步骤2)中准备好的培养基内部，进行培育；

5)对步骤4)中的培养基中添加浓度不同的硒，并根据正交实验法求得生物量、硒含量最大的富硒酵母；

6)将步骤5)中富硒酵母培养后的发酵液通过离心机进行固液分离，喷粉干燥后得到富硒酵母，其中水分含量小于10％。

2.根据权利要求1所述的正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，所述培养基的培养温度为25℃-32℃，且培养基的内部的PH值保持在5.1-5.3。

3.根据权利要求1所述的正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，所述步骤5)中的生物量的测定方式为，取培养液于的离心管中5000r/min离心10min，除去上清液，加入适量蒸馏水漩涡振荡使硒酵母悬浮，再补足水，离心，该步骤反复两次,便得到新鲜的酵母，将新鲜酵母置于烘箱内干燥，冷却至室温，称重，即得酵母产量。

4.根据权利要求1所述的正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，所述步骤5)中的富硒酵母硒含量的测定方法为，Se能够催化氯酸钾氧化苯肼生成偶氨离子，继而与变色酸耦合成红色偶氮染料,生成的红色偶氮染料吸光度与一定浓度范围的硒成正比，利用可见分光光度仪在520nm波长下测定其吸光度,用标准曲线法便可求得硒酵母中的硒含量。

5.根据权利要求3所述的正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，所述干燥烘箱内温度为一百二十摄氏度，且干燥时长为五小时。

6.根据权利要求1所述的正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，所述步骤3)中的酵母菌株紫外线诱导照射的时长为5-100秒。

7.根据权利要求1所述的正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，所述步骤2)中的培养基中各个物质的含量为葡萄糖20％、蛋白胨4％、酵母膏5％、琼脂4％和麦芽汁70％。

8.根据权利要求1所述的正交实验法筛选富硒酵母突变菌株及发酵工艺，其特征在于，所述步骤5)中浓度不同的硒浓度范围为0％、5％、15％、25％、35％、45％和75％。