[发明专利]一种香露兜组培快繁方法

权利要求书

1.一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1：由香露兜母株主茎上新生侧芽，切至1～2cm作为外植体；

步骤2：将外植体进行灭菌消毒后，接种至诱导培养基中，先暗培养，再转光照培养，进行同步诱导和增殖培养；所述诱导培养基含有0.5-0.6mg/L芸苔素；

步骤3：当外植体中分化出幼芽时，取幼芽，接种至与步骤2相同配方的新诱导培养基中继代培养；每培养5～8d，更换一次新的诱导培养基，且每次更换的诱导培养基中的芸苔素增加0.1～0.2mg/L；

步骤4：取≥2cm以上的丛芽植株接种至生根培养基中进行生根培养，直至获得9～12cm高的香露兜幼苗；将＜2cm的丛芽植株回到步骤3中进行继代培养；

步骤5：将步骤4获得的香露兜幼苗经炼苗后，进行种苗移栽培育；

所述诱导培养基为MS、0.03-0.07mg/L TDZ、0.8-1.0mg/L 6-BA、0.5-0.6mg/L芸苔素、0.2-0.8mg/L激动素、0.1-0.5mg/LNAA、1.0-1.5g/L蛋白胨、8-12g/L白糖和4.5-6.0g/L琼脂；所述生根培养基为：1/3MS、0.8-1.5mg/L 6-BA、0.05-0.1mg/L NAA、0.02-0.04mg/L芸苔素、5-7g/L香蕉泥、10-20g/L白糖和7.0-8.0g/L琼脂。

2.根据权利要求1所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：步骤2中，外植体的灭菌消毒，具体为，将外植体采用滴加3～6滴吐温-20的0.05～0.1％氯化汞溶液中浸泡10～15min，采用无菌水冲洗2～3次，再采用浓度为75％的乙醇溶液中浸泡30～60s后，采用无菌水冲洗3～4次，沥干水分。

3.根据权利要求1所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：所述诱导培养基为MS、0.05mg/L TDZ、0.9mg/L 6-BA、0.55mg/L芸苔素、0.5mg/L激动素、0.3mg/LNAA、1.3g/L蛋白胨、10g/L白糖和5.2g/L琼脂；所述生根培养基为：1/3MS、1.2mg/L 6-BA、0.08mg/L NAA、0.03mg/L芸苔素、6g/L香蕉泥、15g/L白糖和7.5g/L琼脂。

4.根据权利要求1所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：步骤2中，将外植体接种至诱导培养基后，先在25±2℃下暗培养5～7d后；后转至26±2℃，光照强度1000～1500lx，光照时间3～5h/d的条件下培养10～12d；再转至相同配方的新诱导培养基中，于26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间6～8h/d的条件下同步诱导和增殖培养。

5.根据权利要求1所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：步骤3中，所述继代培养的温度为28±2℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为10～12h/d，继代培养时间为20～24d。

6.根据权利要求1所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：步骤4中，所述生根培养的温度为28±2℃，光照强度1500～2500lux，光照时间12～14h/d。

7.根据权利要求1所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：在炼苗前，先将步骤4获得的香露兜幼苗转接到固体MS培养基，培养5～7d。

8.根据权利要求7所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：所述香露兜幼苗炼苗具体为，将香露兜幼苗带瓶转至室外常温炼苗5～7d，开盖炼苗3～5d后，进行种苗移栽培育。

9.根据权利要求1所述的一种香露兜组培快繁方法，其特征在于：步骤2～4中，同步诱导和增殖培养的湿度为55-65％，生根培养的湿度为60～80％。