[发明专利]利用固定化提高纳豆激酶热稳定性的方法

权利要求书

1.利用固定化提高所述纳豆激酶热稳定性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

①测定海藻酸钠浓度对包埋纳豆激酶的影响：

将10mL不同浓度的海藻酸钠溶液1.2%、1.4%、1.6%、1.8%分别与1mL的纳豆激酶溶液混合均匀以后，用2.5mL的注射器打入0.3%的CaCl₂溶液中，待凝固成光滑小球后，静置30min后，用纱布过滤取出小球，用相同浓度的CaCl₂溶液继续固定30min，滤出小球，之后用蒸馏水洗涤三次，再用滤纸将表面水分吸干，放入4℃冰箱备用；

②测定CaCl₂溶液浓度对包埋纳豆激酶的影响：

将10mL浓度为1.6%的海藻酸钠溶液与1mL的纳豆激酶溶液混合均匀以后，用2.5mL的注射器分别打入浓度为0.2%、0.3%、0.4%、0.5% CaCl₂溶液中，待凝固成光滑小球后，静置30min后，用纱布过滤取出小球，用相同浓度的CaCl₂溶液继续固定30min，滤出小球，之后用蒸馏水洗涤三次，再用滤纸将表面水分吸干，放入4℃冰箱备用；

③测定聚乙二醇缩水甘油醚浓度对包埋纳豆激酶的影响：

向之前固定好的光滑小球加入不同浓度的聚乙二醇缩水甘油醚0.1%、0.2%、0.3%、0.4%，在25℃的条件下震荡交联1h；用纱布过滤取出小球后，蒸馏水洗涤三次，再用滤纸将表面水分吸干，放入4℃冰箱备用；

将包埋好的光滑小球放入装有20mL 0.9%的生理盐水中，超声破碎5min，之后按照纳豆激酶活力测定的方法测定包埋后纳豆激酶的酶活；

④经上述①-③单因素步骤之后，选取海藻酸钠浓度、CaCl₂浓度、聚乙二醇缩水甘油醚浓度进行三因素三水平正交试验。

2.根据权利要求1所述利用固定化提高所述纳豆激酶热稳定性的方法，其特征在于，用温度测试纳豆激酶的活性对比，包括以下步骤：

ⅰ、温度对纳豆激酶活性的影响：

分别取纳豆激酶发酵液3mL，放入不同温度40、45、50、55、60、65、70、75、80℃水浴锅中，水浴10min，按照酶活测定的方法测定纳豆激酶的酶活；

ⅱ、温度对被包埋的纳豆激酶活力的影响：

分别取包埋效果最佳的光滑小球，放入不同温度40、45、50、55、60、65、70、75、80℃水浴锅中，水浴10min，超声破碎处理5min，之后按照纳豆激酶活力测定的方法测定纳豆激酶的酶活；

ⅲ、比较游离酶和固定化酶的酶活。