[发明专利]一种促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法

权利要求书

1.一种促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法包括：

丛枝菌根真菌孢子的筛选，称取含丛枝菌根真菌的沙子菌剂倒入无菌水，搅拌；先过目筛，滤液过目筛，收集筛面上的物质置于离心管中，进行离心；沉淀中再加入蔗糖溶液，充分悬浮后，进行离心；将上清液过目筛，将筛面上的孢子转入到无菌烧杯中；

丛枝菌根真菌孢子的消毒，将步骤一中无菌烧杯中收集的孢子倒入无菌的自制消毒装置中，用无菌水冲洗数遍，再加入消毒液，盖紧离心管盖，振荡，消毒，用无菌水冲洗；再用链霉素和的庆大霉素混合液的抗生素溶液浸泡孢子；以无菌水冲洗数遍，消毒完成后将滤布上的孢子用少量无菌水冲洗到无菌培养皿中备用；

孢子挑选及接种，将解剖镜在超净工作台上紫外消毒，用酒精擦拭，将装有孢子的无菌培养皿置于镜头下；用无菌枪头吸取单个孢子接种到平板上，每个培养皿上分别接相应个数的孢子，在相应的温度范围内下培养一段时间后观察。

2.如权利要求1所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述丛枝菌根真菌孢子的筛选具体包括：称取含丛枝菌根真菌的沙子菌剂50g倒入500ml无菌水，搅拌；先过80目筛，滤液过400目筛，收集筛面上的物质置于50ml离心管中，3000rpm离心10min；沉淀中再加入50％的蔗糖溶液，充分悬浮后，3000rpm离心10min；将上清液过400目，将筛面上的孢子转入到无菌烧杯中。

3.如权利要求1所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述丛枝菌根真菌为摩西球囊霉菌。

4.如权利要求1所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述自制消毒装置为丛枝菌根真菌孢子的自制消毒装置。

5.如权利要求1所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述丛枝菌根真菌孢子的消毒具体过程为：将无菌烧杯中收集的孢子倒入无菌的自制消毒装置中，用无菌水冲洗数遍，再加入消毒液2％的氯胺T或加入2滴Tween 20，盖紧离心管盖，振荡，消毒2min，用无菌水冲洗；再用浓度为200mg.l^-1链霉素和100mg.l^-1的庆大霉素混合液的抗生素溶液浸泡孢子15min；以无菌水冲洗数遍，消毒完成后将滤布上的孢子用少量无菌水冲洗到无菌培养皿中备用。

6.如权利要求1所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述无菌培养皿中基础培养基为植物凝胶，分别加入不同浓度的硒供给。

7.如权利要求6所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述不同浓度的硒以Na₂SeO₃的形式供给。

8.如权利要求1所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述孢子挑选及接种具体过程为：将解剖镜在超净工作台上紫外消毒30min后，用酒精擦拭，将装有孢子的无菌培养皿置于镜头下或培养皿上方用无菌塑料培养皿盖盖上；用无菌枪头吸取单个孢子接种到平板上。

9.如权利要求1所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述每个培养皿上分别接30个孢子，在25℃±0.5℃下培养21天后观察。

10.如权利要求6所述促进丛枝菌根真菌孢子萌发及菌丝生长的方法，其特征在于，所述基础培养基为1.5％的植物凝胶和20μg.ml^-1硒时，孢子萌发率最好，且菌丝生长状态最好。