[发明专利]一种检测EGFR基因L858R和Del E746-A750突变的试剂及其应用

说明书

本发明公开了一种检测EGFR基因L858R和Del E746‑A750突变的试剂及其应用，所述试剂包括序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.3所示的第一引物对及序列如SEQ IDNo.4及SEQ ID No.5所示的第二引物对。通过本发明方案的制备的试剂对L858R和DelE746‑A750基因突变进行检测，特异性高，灵敏度高，同时减少了野生型背景对检测结果的干扰，时间短，成本低。

技术领域

本发明属于生物技术及医学领域，具体涉及一种检测EGFR基因L858R和Del E746-A750突变的试剂及其应用。

背景技术

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)基因位于人类7号染色体短臂上，有28个外显子。EGFR编码蛋白是一种跨膜糖蛋白，该蛋白是由1186个氨基酸组成，具有络氨酸激酶(tyrosine kinase，TK)活性，广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞和角细胞等细胞表面。正常情况下，作为细胞表面蛋白可与配体如表皮生长因子EGF(epidermal growth factor)结合，EGFR可被激活，由单体转化为二聚体以及发生自体络氨酸磷酸化，激活后的EGFR可以再磷酸化下游蛋白，对细胞的生长、增殖和分化等生理生化过程起着重要的调控作用。然而，当EGFR基因发生突变，EGFR基因就会过量表达EGFR蛋白并组装到细胞膜表面，导致表皮生长因子受体过多，EGF与EGFR的过多结合，导致细胞发生异常生长和分裂，最终发生癌变。

EGFR基因突变主要发生在TK区域的前四个外显子上面，一般突变有三种类型，分别是缺失突变、替代突变、复制或插入突变。其中，缺失突变主要发生在外显子19上，最常见的是del E746-A750，替代突变主要发生在外显子21上的L858R，这两种突变约占突变的90％，所以对于EGFR基因的突变研究，这两者突变的检测至关重要。对于肿瘤患者的肿瘤基因获取一般来源于组织样本，但是晚期的肺癌患者组织样本不易获取。相关研究发现，在肺癌患者晚期的外周血中发现有来自于肿瘤组织的游离DNA，所以，可以通过对外周血进行EGFR基因的突变检测。EGFR的突变检测目的主要是为了根据患者的自身情况进行个性化治疗，达到最大的治疗效果。

目前对EGFR突变检测手段主要包括测序法与ARMS方法。相关文献报道比较了两种方法的优缺点，测序法的灵敏度低，大约为25％，同时该方法的检测流程复杂、速度慢，同时对分析要求高，仪器成本高，检测试剂成本相对来说低；ARMS方法的灵敏度较高为1％，其检测流程简单，速度快，数据分析要求低，仪器成本低，但是ARMS检测的费用成本高，是由于该方法检测使用的探针需要进行荧光修饰，修饰的费用平均为300元人民币/条，平均一个位点单次反应检测成本需要20元人民币。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种检测EGFR基因L858R和Del E746-A750突变的试剂，能够准确、快速、低成本的检测表皮生长因子受体基因的突变率。

本发明还提出上述试剂的应用。

本发明还提出一种检测EGFR基因L858R和Del E746-A750突变的试剂盒。

本发明还提出上述试剂盒的应用。

本发明还提出一种检测EGFR基因L858R和Del E746-A750突变的方法。

根据本发明的一个方面，提出了一种检测EGFR基因L858R和Del E746-A750突变的试剂，所述试剂包括序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.3所示的第一引物对及序列如SEQ IDNo.4及SEQ ID No.5所示的第二引物对。

在本发明的一些实施方式中，所述所述试剂还包括序列如SEQ ID No.6所示的第一荧光探针和SEQ ID No.7所示的第一猝灭探针和序列如SEQ ID No.8所示的第二荧光探针和SEQ ID No.9所示的第二猝灭探针。