[发明专利]一种γ-氨基丁酸中谷氨酸残留的检测方法

说明书

本发明公开了一种γ‑氨基丁酸中谷氨酸残留的检测方法。本发明所述的检测方法包括下述步骤：将γ‑氨基丁酸供试品溶解并使用衍生化试剂进行柱前衍生化得到供试品溶液；使用高效液相色谱仪对供试品溶液中的谷氨酸残留进行检测。本发明所述的γ‑氨基丁酸中谷氨酸残留的检测方法操作简单、分析时间短、分离度高、检测限低，对色谱柱的损害小。

技术领域

本发明涉及谷氨酸检测的技术领域，尤其涉及一种γ-氨基丁酸样品中谷氨酸残留的检测方法。

背景技术

发酵法生产γ-氨基丁酸是以L-谷氨酸为底物，底物转化不完全并在后续工艺中纯化不彻底的情况下可残留在成品γ-氨基丁酸中，因此建立一种快速高效灵敏的分析方法可有效控制发酵过程及成品杂质。

现有技术中，专利申请CN109030662A公开了一种检测致痫大鼠海马组织谷氨酸及r-氨基丁酸含量的方法，其色谱条件为：采用反向C18柱，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱，其中所述流动相A为40-60mmol/L乙酸钠溶液和四氢呋喃，二者体积比为99:1，所述乙酸钠溶液用冰醋酸调节pH至4.8，所述流动相B为乙腈，该方法的检测时间大于30min，使得每个样品的检测时间较长，如果样品量较多，总测定时间通常要数十个小时，给科研工作带来不便。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种高效液相分析方法，可检测γ-氨基丁酸中谷氨酸的残留量，方法操作简便，分析时间短、分离度高、检测限低，对色谱柱的损害小。

本发明具体技术方案如下：

1.一种γ-氨基丁酸中谷氨酸残留的检测方法，其包含下述步骤：

将γ-氨基丁酸供试品溶解并使用衍生化试剂进行柱前衍生化得到供试品溶液；

使用高效液相色谱仪对供试品溶液中的谷氨酸残留进行检测。

2.根据项1所述的检测方法，其中，流动相A为乙酸钠缓冲溶液，流动相B为乙腈，优选的，所述乙酸钠缓冲溶液中乙酸钠的浓度为45-60mmol/L，优选为55mmol/L。

3.根据项2所述的检测方法，其中，所述流动相A的pH为6.0-8.0，优选为7.0-7.5。

4.根据项2或3所述的检测方法，其中，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，优选的，按照如下的顺序进行梯度洗脱：

0-5.00min:流动相A从90-95体积％减少到75-80体积％，流动相B从5-10体积％增加到20-25体积％；

5.00-7.00min:75-80体积％的流动相A：20-25体积％的流动相B；

7.00-7.01min:流动相A从75-80体积％增加到90-95体积％，流动相B从20-25体积％减少到5-10体积％；

7.01-10.00min:90-95体积％的流动相A：5-10体积％的流动相B。

5.根据项2-4中任一项所述的检测方法，所述流动相的流速为0.8-1.2ml/min，优选为1.0ml/min。

6.根据项1-5中任一项所述的检测方法，其中，所述衍生化试剂为邻苯二甲醛。

7.根据项1-6中任一项所述的检测方法，其中，所述高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱。

8.根据项7中所述的检测方法，其中，所述色谱柱的柱温为30-45℃，优选为40℃。

9.根据项1-8中任一项所述的检测方法，其中，检测波长为335-340nm，优选为338nm。

10.根据项1-9中任一项所述的检测方法，其中，进样量为0.5-5μL，优选为2μL。