[发明专利]一种抗虫转基因玉米AM63插入位点的外源插入片段的旁侧序列及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种抗虫转基因玉米AM63插入位点的外源插入片段的旁侧序列及其应用。所述旁侧序列，其为外源插入片段的5’端旁侧序列，具体为SEQ ID NO.9所示的序列或其特异性片段；和/或，其为外源插入片段的3’端旁侧序列，具体为SEQ ID NO.10所示的序列或其特异性片段；抗虫转基因玉米AM63保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.20180。运用本发明的旁侧序列可对是否成功获得抗虫转基因玉米事件AM63进行有效判断，为监管抗虫转基因玉米AM63及其后代等提供了有力的保障。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种抗虫转基因玉米AM63插入位点的外源插入片段的旁侧序列及其应用。

背景技术

虫害(尤其是玉米螟害)会造成玉米的严重减产，抗虫转基因玉米是世界上最早开展的研究性状之一。抗虫基因主要来源于苏云金芽孢杆菌的Bt杀虫蛋白，其作用机理是使昆虫胃肠产生穿孔，从而使昆虫代谢紊乱而死亡。孟山都公司是转基因抗虫玉米研发与应用的领跑者，其开发的抗虫转基因玉米MON810和MON863都已经进入商品化生产多年。在MON810转基因玉米中表达的Cry1Ab蛋白能有效防治玉米螟，在MON863中表达的Cry3Bb对危害玉米根部的害虫有很好的防治效果。先正达公司也开发了表达Cry1Ab蛋白的转基因抗虫玉米BT11和BT176。先锋公司和陶氏公司共同开发了含Cry34和Cry35的抗玉米根部害虫的转基因玉米。丁群星等(1993)首次报道了用子房注射法将Bt毒蛋白基因导入玉米；王国英等(1995)用玉米悬浮细胞、愈伤组织和幼胚作受体，通过基因枪轰击法成功地将Bt毒蛋白基因转入玉米细胞，并获得了大量转基因植株；周逢勇等(1998)将Bt杀虫蛋白导入玉米自交系P9-10，外源基因能稳定遗传到转基因植株后代。张艳贞等(2002)对根癌农杆菌介导法将Bt杀虫基因导入优良玉米自交系进行了较为系统的研究。

截止目前，国产转基因植酸酶玉米BVLA430101、抗虫耐除草剂玉米DBN9936、瑞丰125和耐除草剂玉米DBN9858已被认为符合安全标准。随着转基因玉米的商业化应用将加快玉米产业升级。为今后转基因玉米的可持续利用，有必要研发更多的抗性优良转化体。

我们将改造的cry1Ab基因(专利申请号202010553528.0)和cry1m7基因(专利号201410591794.3)构建转化载体p3301UbiAbUbiM7，通过农杆菌介导法转入到玉米基因组中，获得了一个抗虫转基因玉米事件AM63，今后有可能进入商业化种植。对转基因玉米进行转化事件特异性检测，能更好的对转基因玉米进行监督管理。而外源插入片段的旁侧序列和依据此旁侧序列建立的检测方法，是进行监督管理的一个重要指标。因此有必要获得转基因玉米AM63的旁侧序列，并建立鉴定体系以备对此事件的监督管理。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可对抗虫转基因玉米事件AM63进行有效监管的方法。

本发明所述抗虫转基因玉米事件AM63以种子的形式，于2021年3月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为玉米Zea mays，保藏编号为CGMCC NO.20180。

具体地，本发明提供如下技术方案：

抗虫转基因玉米AM63插入位点的外源插入片段的旁侧序列，其为外源插入片段的5’端旁侧序列，具体为SEQ ID NO.9所示的序列或其特异性片段；

和/或，其为外源插入片段的3’端旁侧序列，具体为SEQ ID NO.10所示的序列或其特异性片段；

抗虫转基因玉米AM63保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.20180。

本发明另提供：