[发明专利]基于HIV感染孕产妇克力芝血药浓度的药剂用量设计方法

说明书

本发明公开了基于HIV感染孕产妇克力芝血药浓度的药剂用量设计方法，本发明建立的蛋白沉淀法，操作简捷且成本低，优化了沉淀剂乙酸乙酯的加入倍数，并采用以空白溶剂(纯水)稀释沉淀上清的方法，降低基质效应，提高检测灵敏度，并对稀释倍数进行了优化，以2倍水稀释最佳，本发明建立的LC‑MS/MS方法同时测定人血浆中LPV和RTV的血药浓度，选择性强、重复性好、灵敏、准确，且操作简单、快速，适用于两药复方用后的临床血药浓度监测。

技术领域

本发明涉及血药浓度检测技术领域，具体为基于HIV感染孕产妇克力芝血药浓度的药剂用量设计方法。

背景技术

克力芝即洛匹那韦利托那韦片，适用于与其它抗反转录病毒药物联合用药，治疗成人和2岁以上儿童的人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)感染。

血药浓度系指药物吸收后在血浆内的总浓度，包括与血浆蛋白结合的或在血浆游离的药物，有时也可泛指药物在全血中的浓度。药物作用的强度与药物在血浆中的浓度成正比，药物在体内的浓度随着时间而变化。监测方法主要是高效液相色谱法。临床实践中，同样剂量的药物用于患同种疾病的不同病人，其疗效往往相差很大，有的表现为药到病除，恰到好处；有的疗效一般，病况稍见好转；而有的却疗效不好。其毒副作用表现也不一样，有的几乎无副作用或轻微；有的却严重中毒。这是因为存在着个体差异(年龄、性别、机体状况、遗传、种族等)。

妊娠后，孕妇体内酶有一定的改变，对某些药物的代谢过程有一定的影响。药物不易解毒和排泄，可有蓄积性中毒，在孕早期胎器官形成时，药物对胎儿有一定的影响，故感冒最好不吃药。但万事都是一分为二，孕妇用药有一定的风险，并不是完全无益。一些疾病本身对胎儿、母亲的影响远远超过药物的影响，这时，就应权衡利弊，在医生指导下，合理用药。

患有HIV的孕产妇在妊娠期间仍需服用克力芝，然而服用克力芝需要根据孕产妇的实际身体情况对药剂用量进行定量，传统的定量方法通常样品前处理方法包括液液萃取、固相萃取、碱化沉蛋白结合液液萃取等，该法操作复杂且回收率一般较低；而采用固相萃取法时，固相萃取成本太高且耗时，采用蛋白沉淀联合萃取的提取方法，以及采用NaOH溶液碱化生物样品后，再用叔丁基甲基醚萃取药物，这些方法操作均较复杂，不能快速准确的对血药浓度进行检测。

发明内容

本发明的目的在于提供基于HIV感染孕产妇克力芝血药浓度的药剂用量设计方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：基于HIV感染孕产妇克力芝血药浓度的药剂用量设计方法，包括如下步骤：

S1：制备内标溶液：使用分析天平称取内标MS275样品10mg，加入至10ml容量瓶中，加入乙酸乙酯溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即可配得1mg/ml的对照品储备液，放置于冷藏装置保存；

S2：制备沉淀剂：向1mg/ml的对照品储备液加入乙酸乙酯，稀释至100ng/ml，得到沉淀剂；

S3：血浆样品预处理：取人血浆样品10ml于离心管中，加入S3中制备的沉淀剂30ml，涡旋振荡，9000xg离心，取上清液10ml，得到血液样品；

S4：柱层析：将S3所得的血液样品加入硅胶，然后通过旋转蒸发器蒸干，蒸干为温度25℃，将蒸干后的硅胶混合物加入色谱柱，将色谱柱安放在过柱机进行过柱子，获得克力芝的溶液，将过柱子获得的克力芝溶液加入至圆底烧瓶，再次使用旋转蒸发器蒸干，旋转蒸发器温度为40℃，获得克力芝固体；

S5：质谱分析：将S4所得的克力芝固体取一定量通过液相色谱-三重四级杆质谱联用仪进行色谱分析；

S6：绘图：将S4获得的色谱结果进行绘制；