[发明专利]一种检测MYH7基因突变的引物探针组合物及其应用

说明书

本发明提供了一种检测MYH7基因突变的引物探针组合物及其应用，所述检测MYH7基因突变的引物探针组合物包括检测MYH7基因突变位点c.2652GT的实时荧光PCR引物和探针；所述实时荧光PCR引物包括SEQ IDNo.1～2所示的核苷酸序列；所述探针包括野生型MYH7的探针和突变型MYH7的探针；所述野生型MYH7的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述突变型MYH7的探针包括SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；所述探针为Taqman探针，所述Taqman探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有淬灭基团。所述引物探针组合物灵敏性高，特异性好，应用价值高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种检测MYH7基因突变的引物探针组合物及其应用。

背景技术

肥厚型心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy，HCM)是一种最常见的遗传性心脏疾病，主要表现为左心室或双心室不对称性肥厚，少数患者表现为左心室流出道梗阻，主要病理特征为心肌细胞弥漫性肥大、畸形、核大、深染及心肌纤维紊乱等。HCM临床表现为从无征兆逐渐发展至呼吸困难、晕厥、胸痛甚至引发心源性猝死和致命性心律失常。

HCM的致病基因主要包括肌节蛋白基因和能量代谢基因，这些基因突变后最终导致心肌细胞供能不足、心脏结构功能受损以及部分心肌细胞死亡，不能完成正常的生理过程，最终发生肥厚型心肌病。心脏肌节主要包括粗肌丝和细肌丝，肌节基因相关位点的突变，破坏了肌球蛋白和肌动蛋白之间的肌丝滑动，改变了心肌细胞内的钙信号通路，影响了左心室的发育和心肌壁的结构，最终导致心脏的功能不全。MYH7是HCM的最主要致病基因之一，位于染色体14q11.2～q12，全长29.924kb，共40个外显子，编码1935个氨基酸，其主要遵循常染色体显性遗传模式，部分HCM患者也表现为常染色体隐性或性染色体遗传。该基因高表达于心肌组织，编码β-肌球蛋白重链，其突变后，对Ca²⁺的亲和力和敏感性加强，刺激Ca²⁺的释放异常，增加了肌节之间的滑行，使心肌细胞排列紊乱及产生代偿性肥厚，最终导致HCM的发生。

基因突变的研究已成为当今生命科学领域研究的热点之一，在这样的背景下，其检测技术也得到了飞速的发展。目前，遗传疾病基因突变的检测方法较多，如：限制性片段长度多态性、等位基因特异PCR扩增、单链构象多态性、高分辨率溶解曲线分析、PCR扩增直接进行毛细管电泳测序和高通量测序等，上述方法各有优缺点。CN102965428A公开了一种检测遗传性心肌肥厚相关基因突变样品制备试剂盒，该试剂盒采用探针捕获后，再进行测序的方法，针对多个基因的多个变异位点进行检测，但过程十分繁琐，耗时较长，且价格十分昂贵，限制了相关产品的使用与推广。

引起HCM发病的突变位点较多，早期分子检测和预防尤为关键。因此，如何建立一种简便、快速、经济和准确的HCM基因突变筛查方法，为HCM的预防、辅助临床诊断和预后评估提供技术支持，已成为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种检测MYH7基因突变的引物探针组合物及其应用，使用不同的荧光报告基团分别对野生型MYH7的探针和突变型MYH7的探针进行标记，再结合质控品的检测结果，可以对MYH7基因的新突变位点c.2652GT的突变情况进行检测，结果准确，操作简单，应用价值极高。

为达此目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种检测MYH7基因突变的引物探针组合物，所述检测MYH7基因突变的引物探针组合物包括检测MYH7基因突变位点c.2652GT的实时荧光PCR引物和探针；

所述实时荧光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列；

所述探针包括野生型MYH7的探针和突变型MYH7的探针；