[发明专利]一种用小鼠检验A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法

说明书

本发明涉及一种用小鼠检验A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法。基于本发明技术方案提供的用小鼠检验A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法可以有效使用小鼠代替实验猪建立A型塞内卡病毒灭活疫苗效力检验的替代方法，消除非洲猪瘟对生物制品研究猪舍生物安全影响，有效降低A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力检验动物及饲料成本，缩短检验周期，且操作简单、易行。试验结果表明，使用小鼠替代试验猪进行A型塞内卡病毒病灭活疫苗，试验数据表明疫苗免疫试验猪和小鼠的效力检验结果一致，小鼠可以作为替代动物进行效力检验。

技术领域

本发明涉及一种用小鼠检验A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法，属于兽用生物制品 领域。

背景技术

A型塞内卡病毒(Senecavirus A，SVA)，前称塞内卡谷病毒(Seneca Valleyvirus，SVA) 是一种新兴的小核糖核酸病毒(Picornaviridae)，无膜包被，单股正链，分属于塞内卡属，是 该家族唯一成员，该病毒感染猪后可使感染猪出现水泡性病变和新生仔猪死亡，症状与口蹄疫 极为相似，容易发生混淆。在2014年之前，仅在美国和加拿大发现SVA；自2014年年底始， SVA在巴西、哥伦比亚、泰国、中国等北美以外的主要猪生产国家和地区相继爆发，北美地 区也出现新的病例，与之前低感染率和致死率相比较，新爆发的病症更加猛烈，影响范围更广， 对当地养猪业的生产和发展造成更大的威胁。且作为一种新的病原体，SVA迅速传播，其临 床症状与其它引起猪水泡性症状的病毒感染难以区分，已造成显著的经济损失。

对A型塞内卡病毒的防控主要以预防为主，然而，目前尚没有可有效防控A型塞内卡病 毒病商品化疫苗上市，疫苗正处于研发阶段。A型塞内卡病毒试验苗的效力检验主要依靠猪体 进行，在疫苗的研制和后续检验过程中，试验阴性猪筛选成本很大，筛选时间较长。另受到非 洲猪瘟疫情影响，试验猪价格较高且存在较高的生物安全风险。因此，需要建立一种A型塞 内卡病毒病灭活疫苗效力检验的替代方法。

在我们实验室研究过程中，我们发现A型塞内卡病毒攻毒小鼠，病毒在小鼠体内分布及 病毒血症消长规律与猪平行性极好，小鼠是一种很好的A型塞内卡病毒致病性替代动物模型。 我们在后续实验室研究过程中，进一步证实猪和小鼠保护效果存在免疫保护相关性。

小鼠免疫攻毒作为A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力检验方法，简单、易行，且可有效节 约检验成本，极大降低生物安全风险。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，即疫苗正处于研发阶段。A型塞内卡病毒试 验苗的效力检验主要依靠猪体进行，在疫苗的研制和后续检验过程中，试验阴性猪筛选成本很 大，筛选时间较长。另受到非洲猪瘟疫情影响，试验猪价格较高且存在较高的生物安全风险。 因此，需要建立一种A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力检验的替代方法。本发明的技术方案为：

1.一种用小鼠检验A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法，包括以下步骤：

使用A型塞内卡病毒病灭活疫苗对若干小鼠进行免疫接种；免疫接种21～28d后，使用A 型塞内卡病毒液对已免疫小鼠进行攻毒；攻毒后7～14天剖杀小鼠，取小鼠组织进行病毒分离， 免疫小鼠内脏病毒分离阴性率≥90％，即可判定A型塞内卡病毒病灭活疫苗保护效力合格。

2.如权利要求1所述的一种用小鼠检验A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法，其特征 在于，所述小鼠为Balb/C小鼠或昆明小鼠；小鼠免疫接种的剂量为至少0.1mL，接种途径采 用腿部肌肉或腹腔注射；对已免疫小鼠进行攻毒的毒量为至少0.1×10^4.5TCID₅₀。

3.如权利要求1所述的一种用小鼠检验A型塞内卡病毒病灭活疫苗效力的方法，其特征 在于所述病毒分离方法，病毒分离需传代包括但不限于3代；所述病毒分离组织包括但不限于 皮肤、心、肝、脾、肺、肾、脑等组织及血清。

本发明新的技术效果