[发明专利]一种花生果腐病菌的致病性鉴定方法

权利要求书

1.一种花生果腐病菌的致病性鉴定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）花生果腐病菌的分离：从田间采集带果腐病的花生荚果，对病原菌株进行分离纯化；

（2）果腐病病原真菌的培养：分离的菌株于PDA平板上进行25℃黑暗培养，3天后于菌落边缘新鲜区域切取4*4mm大小的菌丝块，用于接菌于花生材料上进行致病性测定；

（3）用于接菌的花生植物材料的制备：准备无病斑的去壳花生仁，消毒后转移至无菌水中进行浸泡处理36小时，然后去皮，将花生仁的两片子叶分开，把两片子叶间生长点切除，保留子叶，每片子叶为一个接种材料；

（4）接菌：浸泡后的花生仁子叶整齐摆放于垫有吸水纸并且加水保湿的托盘中，水量没过供试花生接种材料的一半；对每个花生仁子叶表面进行创伤，将菌丝面贴于创伤处；托盘盖上保鲜膜进行保湿，置于25℃黑暗培养；

（5）判定致病力强弱：侵染致病情况统计，根据发病严重度和发病率，判定致病力强弱。

2.根据权利要求1所述的花生果腐病菌的致病性鉴定方法，其特征在于，对病原菌株进行分离纯化的具体步骤为：清水洗净果荚，将病健交界处的花生果壳切成3*3mm的小块，进行表面消毒后置于PDA平板上25℃培养2-3天，挑取菌落新鲜尖端转接于新的PDA平板上，获得纯培养后，挑取菌丝破碎提取DNA,利用真菌ITS区通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增，测序后在GenBank进行比对，鉴定分离菌株。

3.根据权利要求1所述的花生果腐病菌的致病性鉴定方法，其特征在于，步骤（3）中花生仁消毒的方法为采用75%乙醇表面消毒30s，10%次氯酸钠表面消毒3-5min，用无菌水冲洗4次。

4.根据权利要求1所述的花生果腐病菌的致病性鉴定方法，其特征在于，步骤（4）中对每个花生仁子叶表面进行创伤处理的方法为：用手术刀在接种材料中心位置划一道5mm伤口。

5.根据权利要求1所述的花生果腐病菌的致病性鉴定方法，其特征在于，花生果腐病严重度分级标准为：

0级：不发病；

1级：接种部位产生病斑，病斑大小不超过子叶面积的1/4；

3级：病斑大小为子叶面积的1/4-1/2；

5级：病斑大小超过子叶面积的1/2；

7级：整片子叶发病。