[发明专利]一种驴Zfy基因的RNA干扰片段、表达载体及其应用

说明书

本发明属于分子遗传学的技术领域，本发明提供了一种驴Zfy基因的RNA干扰片段、表达载体及其应用。本发明提供的RNA干扰片段包括如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的序列。本发明提供的RNA干扰片段，对驴Zfy基因的表达进行人为干扰，使Y精子的生成和发育受阻，为X精子创造更多的受精机会，从而使子一代的母驴比例增加，达到控制后代驴性别的目的。

技术领域

本发明涉及分子遗传学的技术领域，尤其涉及一种驴Zfy基因的RNA干扰片段、表达载体及其应用。

背景技术

实现对家畜的性别控制，意义重大。动物性别控制的意义在于：(1)提高畜牧业生产效益；(2)生产具有利用价值的性别的动物(一般雌性动物的利用价值要高于雄性动物)；(3)避免胚胎移植过程中异性胚胎导致的孪生不育；(4)提高选种强度；(5)预防伴性遗传病的发生等。对动物性别控制的相关研究早在多年前就已经开始。动物的性别控制(sexcontrol)是指通过对动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一门生物技术。目前国内外家畜进行性别控制的方法主要有三种:(1)分离X精子与Y精子。通过X、Y精子微弱的生物学差异，分离出含两种不同染色体的精子，目前主要采用物理分离法，如采用流式细胞分离仪分离精子的准确率可达到90％，但其分离速度太慢(18mil-lion/h)，且精液价格昂贵，分离后精液不耐冷冻，后代畸形率较高，因而在生产应用上受到限制；(2)胚胎的性别鉴定。胚胎性别鉴定主要是通过鉴定胚胎的性别，从而人工干预出生的性别比例。早期胚胎性别鉴定方法主要有细胞学方法、免疫学方法、分子生物学方法、PCR扩增法、雄性特异性DNA探针法等，但从胚胎上切取部分细胞而后经冷冻、解冻会对胚胎造成一定的损害使胚胎移植的成功率下降，同时劣质胚胎的性别鉴定成功率更低，这就制约了提供预知性别家畜胚胎的商业化进程；(3)控制家畜受精的外部环境。家畜外部环境中的某些因素也是性别决定机制的重要条件，主要包括营养、体液酸碱度、温度、输精时间、年龄胎次、激素水平等。但决定动物性别的因素主要是动物体的内部因素，采用控制外部环境的方法来控制出生动物性别，随机性大，不稳定，且不易控制。如今，随着科学技术水平的发展，从基因水平研究性别控制已经成为一种新的方向，同时随着基因技术的日趋成熟，基因技术的成本也大幅下降，使其在生产应用中大规模推广成为了一种可能。

RNA干扰(RNAInterference)是一种转录后水平的基因沉默现象，是通过体外人工合成双链RNA或体内的双链RNA在细胞内特异性降解其同源mRNA，使相应的基因沉默，达到阻止基因表达的目的，且具有特异、高效、易于操作等优点。

Zfy基因位于哺乳动物Y染色体上，负责编码一个大的酸性链锌指蛋白上的12～13个转录因子的特异性基因。Zfy基因具有特定的核定位信号区域和DNA结合位点，能够特异性的与靶基因结合，定向引导靶基因穿过核膜，定位于精子细胞核内，其编码蛋白作为转录调控因子，与Y精子的发育相关。通过RNA干扰技术，沉默Zfy基因是实现性别控制的可行途径。目前通过沉默Zfy基因能够实现性别控制的动物包括小鼠(CN201110072013.6)、绵羊(CN201510639871.2)、犬(CN201610584301.2)、牛(CN201910069205.8)。

发明内容

本发明的目的在于利用RNA干扰技术对驴后代进行性别控制。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种RNA干扰片段，所述RNA干扰片段包括如SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2所示的序列。

本发明还提供了一种包括所述RNA干扰片段的表达载体。

本发明还提供了一种所述RNA干扰片段或所述表达载体在制备控制后代驴性别的制剂、试剂盒中的应用。

优选的，所述RNA干扰片段或所述表达载体用于沉默驴精子细胞中的Zfy基因。