[发明专利]一种具有预防慢性酒精性肝损伤作用的活性肽

说明书

本发明公开了一种具有预防慢性酒精性肝损伤作用的活性肽，其氨基酸序列为Gly‑Thr‑Tyr‑Trp(GTYW)。本发明所提供的活性肽在慢性酒精性肝损伤动物模型实验中，可以显著降低小鼠血清AST、ALT活力及肝脏/血清TG含量，显著升高小鼠肝脏AST、ALT活力，并且通过病理切片可看到由乙醇导致的肝组织损伤逐渐改善，由此表明GTYW具有预防慢性酒精性肝损伤的作用。本发明不仅能够提高豆粕的经济附加值，还为保肝护肝产品的开发利用提供新思路。

技术领域

本发明属于生物活性肽领域，具体涉及一种具有预防慢性酒精性肝损伤作用的活性肽。

背景技术

酒作为一种饮品，无论是在日常饮食，还是在社交场合，都是必不可少的。适度饮酒，不仅能使人精神愉悦，起到缓解疲惫、解忧消愁的作用，还能促进血液流动、胃肠消化等。然而过度饮酒，尤其是长期慢性饮酒，会对多种器官系统造成损伤，例如导致肝损伤。近年来，酒精性肝病的发病率逐年上升，酒精已成为仅此与肝炎病毒导致肝损伤的第二大病因，严重危害到了人类的生命健康。因此，开发安全有效的保护护肝产品，具有重要的社会意义和实用价值。

目前市面上存在的保肝护肝产品，大多是天然来源的粗提物，虽然也有一定的保肝效果，但是其成分不能确定，质量也难以保证。因此，利用现代技术对提取的天然产物进行分离纯化，并对其组成进行鉴定，明确具体的生物活性成分，是开发新一代保肝护肝产品的重要手段。

豆粕是豆油加工的主要副产物，在国内主要应用于畜牧业，在食品工业上应用较少，造成了豆粕资源的极大浪费。豆粕中含有丰富的优质蛋白，是制备生物活性肽的良好来源。研究发现，用豆粕制备活性肽，具有良好的抗氧化、抗疲劳、降血压等活性，而氧化应激是导致酒精性肝损伤的重要发病机制之一，因此，豆粕活性肽具有潜在的预防酒精性肝损伤的作用，然而目前并未有相关的研究报道。

本发明是从豆粕中制备了活性肽，经分离纯化及质谱鉴定，确定了出一条氨基酸序列。通过慢性酒精性肝损伤的动物模型，发现该序列活性肽具有预防慢性酒精性肝损伤的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有预防慢性酒精性肝损伤作用的活性肽，以解决开发具有明确生物活性成分的保肝护肝产品问题。

本发明的一种具有预防慢性酒精性肝损伤作用的活性肽，其获得可利用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶对豆粕进行酶解，并借助多维色谱纯化(凝胶过滤色谱、亲和色谱和液相色谱)实现，也可以通过固相合成的方法获得。优选为通过固相合成的方法获得。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

(1)活性肽的制备、分离纯化及鉴定

将市售的豆粕通过粉碎机破碎，并经过60目筛子筛分得到豆粕粉。按照底物浓度10％调配豆粕溶液，搅拌均匀后进行超声处理。超声结束后，将溶液置于煮沸的水浴锅中进行蛋白质变性。变性后的溶液降温至30～60℃，用酸碱液调节pH至碱性，然后加入碱性蛋白酶开始酶解，加酶量3000～11000U/g，酶解时间1-5h。酶解结束后，将溶液置于煮沸的水浴锅中进行灭酶。灭酶后的溶液需降至室温，然后在低温下离心得到活性肽。对活性肽进行超滤处理，分离纯化出分子量小于1kDa的组分，对该组分进行脱盐处理，然后借助LC-MS/MS鉴定结构。依据质谱图信息，并结合软件分析及蛋白质数据库，确定出活性肽的氨基酸序列为Gly-Thr-Tyr-Trp(GTYW)。

(2)活性肽GTYW具有预防慢性酒精性肝损伤的作用

采用固相合成法合成活性肽GTYW。通过在慢性酒精性肝损伤的动物模型中灌胃GTYW，发现活性肽能够显著降低小鼠血清中AST、ALT活力及肝脏/血清中TG含量，显著升高小鼠肝脏中AST、ALT活力，能改善小鼠病理切片中由乙醇导致的肝组织损伤。

本发明具有以下有益效果：