[发明专利]检测红细胞表面有无不完全抗体的方法、系统及其应用

说明书

本发明涉及检测红细胞表面有无不完全抗体的方法、系统及其应用，属于生物检测技术领域。本发明提供了一种基于固相吸附的检测红细胞表面有无不完全抗体的方法，所述方法为将待检测红细胞和抗人球蛋白添加至包被有丙种球蛋白的容器中进行离心，离心结束后，观察待检测红细胞在包被有丙种球蛋白的容器底部是否被吸附，若待检测红细胞在包被有丙种球蛋白的容器底部被吸附，则待检测红细胞表面有不完全抗体，若待检测红细胞在包被有丙种球蛋白的容器底部不被吸附，则待检测红细胞表面无不完全抗体；所述方法在保持较高的灵敏度和特异性的前提下，具有更低的检测成本，且所述方法具有易于自动化操作的优势，能避免操作过程中的人为误差，提高工作效率。

技术领域

本发明涉及检测红细胞表面有无不完全抗体的方法、系统及其应用，属于生物检测领域。

背景技术

抗人球蛋白试验(antiglobulin test)是1945年由Coombs创立的用于检测受血者或者孕妇、新生儿血清(血浆)或红细胞上有无IgM抗体之外的不完全血型抗体的技术，又称Coombs试验，其中，用于检测红细胞上除IgM抗体之外的其他不完全血型抗体的方法称为直接抗人球试验(Direct antiglubin test,DAT)。直接抗人球试验用于评估受血者、孕妇、胎儿发生IgM之外的其他不完全血型抗体引起溶血的风险。

目前，通用的直接抗人球试验是利用不完全抗体和红细胞在抗人球蛋白介导下体外发生凝集反应的原理，常用的方法有试管法、微板法、微柱凝胶法等方法(试管法、微板法、微柱凝胶法均记载于《全国临床检验操作规程》中)。其中，试管法和微板法是以不完全抗体与红细胞在抗人球蛋白介导下形成的凝集块的大小判断凝集强度，从而达到检测受检者红细胞是否被IgM之外的其他不完全血型抗体致敏的目的；微柱凝胶法是在凝胶中添加抗人球抗体，通过离心，红细胞上吸附有IgG类血型抗体的会被阻滞在凝胶上层，形成一个红细胞凝集条带，没有吸附IgG类血型抗体的红细胞通过离心到达微柱底部，从而判断红细胞是否被IgG类血型抗体致敏。但是，这些方法均存在缺陷，例如：

试管法需要人工进行混匀的步骤，费时费力，并且，试管法在对凝集程度进行判定时需要晃动试管，力度对检测结果易造成影响，同一份样本不同的人可能会产生不同的判定结果，尤其是对于一些弱阳性样本，容易产生人工误差；

微板法抗体和红细胞的加样量和抗体批间差异会影响结果的稳定性；

微柱凝胶法在运输过程中试剂凝胶容易变形和产生气泡，气温对凝胶分子筛的大小也会产生影响，从而对最终检测结果的稳定性和可靠性产生影响。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种检测红细胞表面有无不完全抗体的方法，所述方法包含检测步骤；所述检测步骤为：将待检测红细胞和抗人球蛋白添加至包被有丙种球蛋白的容器中进行离心，离心结束后，观察待检测红细胞在包被有丙种球蛋白的容器底部是否被吸附，若待检测红细胞在包被有丙种球蛋白的容器底部被吸附，则待检测红细胞表面有不完全抗体，若待检测红细胞在包被有丙种球蛋白的容器底部不被吸附，则待检测红细胞表面无不完全抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述丙种球蛋白为人血丙种球蛋白。人血丙种球蛋白是从人血液中纯化的IgG类抗体，该抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的混合物。

在本发明的一种实施方式中，所述不完全抗体包含IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4。

在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为90～360g、时间为1～30min。

在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为190～360g、时间为1～3min。

在本发明的一种实施方式中，所述检测步骤前，还包含稀释步骤；所述稀释步骤为：将待检测红细胞稀释至浓度为0.3～1％。

在本发明的一种实施方式中，所述稀释步骤为：用Liss(低离子强度溶液)或生理盐水将待检测红细胞稀释至浓度为0.3～1％。