[发明专利]一种工程细胞株FCHO/IL-24的无血清悬浮培养驯化方法

说明书

本发明公开了一种工程细胞株FCHO/IL‑24的无血清悬浮培养驯化方法，包括以下步骤：(1)通过梯度降低血清浓度，驯化工程细胞株FCHO/IL‑24能够在0.5％血清贴壁条件下培养；(2)将步骤(1)得到的工程细胞株FCHO/IL‑24直接从0.5％血清贴壁培养驯化为0.5％血清悬浮培养；(3)将步骤(2)得到的工程细胞株FCHO/IL‑24在无血清培养基中悬浮培养。本申请通过梯度降低血清浓度，先驯化工程细胞株FCHO/IL‑24能够在0.5％血清贴壁条件上培养，再进行悬浮培养，最后使其能够在无血清培养基中悬浮培养，不仅能保持较高的细胞密度，同时还能稳定分泌表达rhIL‑24，为后续的悬浮培养条件和无血清培养基成份的优化奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种工程细胞株FCHO/IL-24的无血清悬浮培养驯化方法。

背景技术

癌症是严重威胁人类健康的恶性疾病，位居世界十大死亡原因之首。虽然医学技术进步提高了实体肿瘤手术切除率，加之不断涌现的各种化疗和靶向药物，使得肿瘤患者五年存活率有所提高，也明显改善了患者的生活质量，但肿瘤细胞恶性浸润转移生长特性引起的复发，以及抗肿瘤药物耐药性和对正常细胞的损伤，使得肿瘤患者必须要忍受严重的药物毒副作用，否则只能被迫停止治疗。这就急迫需要发展毒性小、特异性强、疗效好的治疗方法，以有效控制肿瘤恶性进程，寻找能够特异性消灭恶性肿瘤细胞、且对正常细胞无毒副作用的抗肿瘤药物，一直是肿瘤生物学的研究热点。

极为有意义的是，1995年Jiang等人首次报告黑色素瘤分化相关基因-7/白细胞介素24 (mda-7/IL-24)能抑制黑色素瘤细胞增殖，编码一种206个氨基酸残基组成的蛋白质，分子量大约23.8kDa。后续研究发现，IL-24具有广谱而特异的抗瘤活性，它能够在体内外特异性地抑制多种肿瘤生长，并选择性诱导肿瘤细胞凋亡，对正常细胞几乎没有影响，不依赖于p53、 p21、Rb等基因的表达水平，与其他抑瘤基因明显不同。同时，IL-24具有刺激机体抗肿瘤免疫反应的能力，它不仅能刺激外周血单核细胞分泌产生炎性细胞因子，如IL-6、IL-1β、IL-12、 GM-CSF和IFN-γ等，还能增加CD3⁺CD8⁺T细胞数量，从而触发机体产生抑制原发部位肿瘤细胞和转移部位肿瘤细胞的免疫反应，这是p53和Rb等抑癌基因所不具备的特点。而且， IL-24可以增强肿瘤细胞放化疗敏感性，与靶向药物、化疗药物或放疗联用可产生叠加或协同的抗瘤效果。正因为上述的特点，IL-24被称为治疗肿瘤的“神奇子弹”，对其进行深入研究不仅具有重要的理论意义，而且具有重大的临床应用价值。