[发明专利]一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法

说明书

本发明公开了一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，采用pH区带逆流色谱对含有丹酚酸B和紫草酸的样品进行分离纯化；pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。本发明提供的方法能够同时获得丹酚酸B与紫草酸，纯度均在95％以上。

技术领域

本发明涉及一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

滇丹参(Salvia yunnanensis Radix)为唇形科植物云南鼠尾草(Salviayunnanensis C.H.Wright)的干燥根，又称紫丹参，在云南、贵州地区有悠久的药用历史，始载于明代《滇南本草》中。滇丹参的活性作用与丹参(Salvia miltiorrhizaBge.)相似，其生物活性主要是对循环系统的影响，如改善微循环和血液循环功能、提升心脏冠脉血通量并修复心脏功能、降血脂、预防动脉粥样硬化，另外还有肝脏保护、治疗胃溃疡、镇痛、抗氧化、抗菌抗炎、抗肿瘤等。另有研究表明，滇丹参有显著的抑制血小板凝集的作用，且抑制效果明显优于丹参。滇丹参中的酚酸类化合物主要起到抗炎、抗氧化、抗血栓以及心血管保护的作用，以丹酚酸A～K为代表，其中丹酚酸B含量最高。然而，发明人研究发现，丹酚酸B与紫草酸的结构较为类似，采用普通色谱法难以同时获得高纯度的丹酚酸B与紫草酸。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，采用该方法能够同时获得丹酚酸B与紫草酸，纯度均在95％以上。

pH区带逆流色谱是一种液-液色谱技术，根据化合物的pKa和极性的差异实现成分的分离，该技术具有分离效率高、重现性好、进样量大等优点。本发明采用首先以各种溶剂体系(例如石油醚–乙酸乙酯–甲醇–水、乙酸乙酯–甲醇–水、乙酸乙酯–正丁醇–水、乙酸乙酯–水、氯仿–甲醇–水)进行尝试，但是难以实现丹酚酸B和紫草酸的分离提取，当采用叔丁基甲醚–乙腈–水(4:1:5,v/v)作为溶剂系统，结果发现该溶剂系统可以实现丹酚酸B与紫草酸的分离提取，但是分离提取时间较长，仅洗脱丹酚酸B就需要9h，由于分离提取时间较长，造成pH区带逆流色谱分离提取丹酚酸B和紫草酸困难。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

一方面，一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，采用pH区带逆流色谱对含有丹酚酸B和紫草酸的样品进行分离纯化；pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。

本发明经过研究发现以叔丁基甲醚–乙腈–水(4:1:5,v/v/v)作为溶剂系统时，样品在乙腈中的溶解度比在水和叔丁基甲醚中的溶解度都要好，而乙腈对叔丁基甲醚的亲和度更好，导致样品保留时间较长。因而本发明重新调整溶剂系统，经过试验发现，采用该溶剂系统能够使得丹酚酸B和紫草酸在13h即可完成分离，大大降低了丹酚酸B和紫草酸的分离时间。

同时，经过进一步研究发现，固定相的酸浓度和流动相的碱浓度也能够降低丹酚酸B和紫草酸的分离时间，当固定相中的酸浓度4.5～5.5mM、流动相中的碱浓度为59～61mM时，丹酚酸B和紫草酸的分离时间能够缩短至9h。

另一方面，一种上述方法在提取滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的应用。

由于滇丹参中的丹酚酸B含量较高，且存在紫草酸，采用上述方法用于滇丹参的提取，能够有效将滇丹参中的丹酚酸B和紫草酸同时提取出来。

第三方面，一种滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的提取方法，步骤如下：