[发明专利]甜瓜抗落蒂基因CmAL3紧密连锁的分子标记SNP-392及其应用

权利要求书

1.甜瓜抗落蒂基因CmAL3紧密连锁的分子标记SNP-392的引物，其特征在于：所述分子标记SNP-392的引物序列为：

SNP-392F：TGCATAATACTCATTCAACGCA，

SNP-392R：TTGATGCTTACTTTGGTGATGC。

2.权利要求1所述的分子标记SNP-392的引物在鉴定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的应用。

3.根据权利要求2所述的分子标记SNP-392的引物在鉴定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的应用，其特征在于：所述应用具体为：

（1）提取待测样品的DNA，采用分子标记SNP-392的引物进行PCR扩增；

（2）PCR反应产物用于AluI酶切反应，酶切反应在37℃水浴锅中温浴20min，加入4μL 6× loading buffer后于6%聚丙烯酰胺电泳，125V电压电泳60min，在Tanon2500凝胶成像仪进行拍照；

（3）待测DNA样品经过PCR扩增和AluI酶切后，电泳方式检测，266bp片段为含有抗落蒂基因CmAL3甜瓜材料，244bp片段为不含有抗落蒂基因CmAL3，表型为易落蒂甜瓜材料。

4.根据权利要求3所述的分子标记SNP-392的引物在鉴定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的应用，其特征在于：步骤（1）中，PCR反应体系为：30ng/μL DNA 2μL，SNP-392引物上下游各0.2μL，10×PCR buffer 1μL，2.5mM dNTP 0.3μL，Taq酶0.1μL，ddH₂O 6.4μL。

5.根据权利要求3所述的分子标记SNP-392的引物在鉴定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的应用，其特征在于：步骤（1）中，PCR扩增条件为：94℃预变性2min、94℃变性20Sec、68℃退火1min、72℃延伸30Sec，共6个循环，每个循环温度降低2℃；94℃变性20Sec、58℃退火1 min、72℃延伸30Sec，共6个循环，每个循环温度降低1℃；94℃变性20Sec、50℃退火30Sec、72℃延伸30Sec，共20个循环，最后72℃延伸5min。

6.根据权利要求3所述的分子标记SNP-392的引物在鉴定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的应用，其特征在于：步骤（2）中，酶切体系为10 µL：PCR产物5.0 µL、无菌水3.4 µL、内切酶AluI0.6 µL 和 10× NEB Buffer 1.0 µL。

7.权利要求1所述的分子标记SNP-392的引物用于甜瓜抗蒂落分子标记辅助育种。