[发明专利]一种熊果酸衍生物及其制备方法与应用

说明书

本发明属于医药领域，公开了一种熊果酸衍生物及其制备方法与应用。本发明利用微生物转化技术，对熊果酸成功地进行了结构修饰，获得了4个具有母核结构修饰的新型熊果酸衍生物，通过体外抗炎实验证实，这些化合物具有较好的抗炎活性，可以作为抗炎药物的活性成分，具有广泛的用途。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种熊果酸衍生物及其制备方法与应用。

背景技术

熊果酸又名乌索酸，是一类结构比较特殊的五环三萜类成分，存在于多种中草药，如山茱萸、女贞子和五味子等。现代药理研究发现，熊果酸具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降糖、抗肝纤维化等作用。此外，近年来亦有许多关于熊果酸神经保护作用的研究。在化学结构修饰方面，熊果酸的化学合成衍生物在抗肿瘤方面的研究较为丰富，化学结构修饰的位点主要为熊果酸3位的羟基和28位的羧基。但是，由于五环三萜类化合物结构的特殊性，母核缺乏活泼基团，反应位点少，采用常规化学反应方法难以获得母核上具有羟基、羰基等修饰的衍生物。因此，具有母核结构修饰的熊果酸衍生物化学和药理研究尚不全面。

以LPS刺激的巨噬细胞是抗炎活性成分筛选与作用机制研究过程中被广泛采用的炎性细胞模型。巨噬细胞是炎性反应过程中重要的效应细胞，既能够通过抗原识别及呈递来激活免疫反应，同时又通过分泌炎性反应介质导致级联炎性反应。因此减少巨噬细胞炎症介质的分泌是判断药物抗炎效果的一个重要参考指标，而NO是炎症反应过程中常见的炎症因子，通过检测NO的分泌水平，可推测药物的抗炎效果及可能的作用机制。

天然化合物的结构改造与修饰在新药研究中有着重要的地位，对化合物进行结构改造可导致其药理活性产生显著变化。但是，由于熊果酸结构的特殊性，其母核缺乏活泼基团，反应位点少，采用常规化学反应方法难以制备出满足要求的衍生物。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种熊果酸衍生物及其制备方法与应用，采用微生物转化法制备得到，具有明显的抗炎活性，可用于开发抗炎药物。

一种熊果酸衍生物或其药学上可接受的盐，所述熊果酸衍生物的结构式选自如下任一结构式：

其中，式Ⅰ结构的化合物为3-羰基-7β,21β-二羟基熊果酸，式Ⅱ结构的化合物为7β,30-二羟基熊果酸，式Ⅲ结构的化合物为7β,15α,21β-三羟基熊果醇，式Ⅳ结构的化合物为7β,15α,20β-三羟基熊果醇。

本发明还提供了上述熊果酸衍生物的制备方法，包括以下步骤：

1)在培养基中发酵培养微生物，然后加入熊果酸，接着进行转化培养，除去菌丝体后得到发酵液，所述微生物为卷霉(Circinella)属的菌株；

2)将所述发酵液经萃取后，蒸干萃取液，得到转化粗提物；

3)将所述转化粗提物用反相高效液相色谱纯化，获得所述熊果酸衍生物，

所述反相高效液相色谱的制备条件为：半制备用色谱柱YMC ODS-A，10.0I.D×250mm，体积比为45:55的乙腈-水溶液，流速2.5mL/min，检测波长203nm。

优选的，上述制备方法的步骤1)中，进行转化培养前，培养基中熊果酸的浓度为2-5000μg/mL。

优选的，上述制备方法的步骤1)中，所述微生物为蝇卷霉Circinella muscaeCGMCC 3.2695。

优选的，上述制备方法的步骤2)中，所述萃取的萃取溶剂为乙酸乙酯。

本发明还提供了一种上述熊果酸衍生物或其药学上可接受的盐或上述制备方法制备得到的熊果酸衍生物在制备抗炎药物中的应用。