[发明专利]一种星孢菌素骨架化合物的生物糖基化合成体系及其合成方法

权利要求书

1.一种星孢菌素骨架化合物的生物糖基化合成体系，其特征在于，所述生物糖基化合成体系中包含：K252c衍生物、dTDP-L-鼠李糖和糖基转移酶StaG，所述K252c衍生物为Arcyriaflavin A、5,5'diMe-Arcyriaflavin A、5MeO-Arcyriaflavin A或4OH-K252c中的任意一种，结构式如下；

所述糖基转移酶StaG存在于重组大肠杆菌体内；

所述重组大肠杆菌中含有表达糖基转移酶StaG的表达载体，所述糖基转移酶StaG的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码所述糖基转移酶StaG的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述生物糖基化合成体系中，K252c衍生物的摩尔浓度为100~300 μM。

2.一种星孢菌素骨架化合物的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述生物糖基化合成方法包括如下步骤：

将编码糖基转移酶StaG的核苷酸序列连接在表达载体上，导入大肠杆菌中得到重组大肠杆菌，再对所述重组细胞进行培养，经过诱导步骤，表达所述糖基转移酶StaG，得到表达糖基转移酶StaG的重组大肠杆菌培养物，将K252c衍生物与表达糖基转移酶StaG的重组大肠杆菌培养物混合，得到如权利要求1所述的生物糖基化合成体系，进行反应；

所述糖基转移酶StaG的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码糖基转移酶StaG的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述K252c衍生物为Arcyriaflavin A、5,5'diMe-Arcyriaflavin A、5MeO-Arcyriaflavin A、6F-Arcyriaflavin A或4OH-K252c中的任意一种，结构式如下；

3.根据权利要求2所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述反应的温度为20~25℃。

4.根据权利要求2所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述反应的时间为10~20h。

5.根据权利要求2所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述反应后还包括加热的步骤。

6.根据权利要求5所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述加热的温度为80~85℃。

7.根据权利要求5所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述加热的时间为10~15min。

8.根据权利要求2所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述反应后还包括萃取的步骤。

9.根据权利要求8所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述萃取使用的萃取剂包括乙酸乙酯。

10.根据权利要求8所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述萃取的温度为30~37℃。

11.根据权利要求8所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述萃取的时间为20~40min。

12.根据权利要求2所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，在表达糖基转移酶StaG的重组大肠杆菌培养物的制备中，所述诱导使用的诱导剂包括0.05~0.5 mM IPTG，所述诱导的温度为16~25℃，时间为2~3 h。

13.根据权利要求2所述的生物糖基化合成方法，其特征在于，所述生物糖基化合成方法包括如下步骤：

（1）将编码糖基转移酶StaG的核苷酸序列连接在表达载体上，导入大肠杆菌中得到重组大肠杆菌；

（2）对所述重组大肠杆菌进行培养，在16~25℃下使用0.05~0.5 mM IPTG诱导2~3 h，得到表达所述糖基转移酶StaG的重组大肠杆菌培养物；

（3）再向所述重组大肠杆菌培养物中直接加入K252c衍生物，20~25℃下反应10~20 h，而后80~85℃加热10~15 min，采用乙酸乙酯萃取。