[发明专利]用于制备短肽混合物的融合蛋白、目的多肽、短肽混合物的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种用于制备短肽混合物的融合蛋白、目的多肽、短肽混合物的制备方法，应用；短肽混合物的制备方法具体为：将融合蛋白的编码基因和不同蛋白酶的编码基因插入相应的载体，得到相应的重组表达载体，并将重组表达载体转入相应的宿主细胞，得到相应重组工程菌；培养工程菌得到融合蛋白和不同的蛋白酶，其中一些蛋白酶酶切融合蛋白得到目的多肽，另一些蛋白酶酶切目的多肽得到短肽混合物；减少了后续分离纯化工艺中的步骤和时间，使用的化学试剂大大减少，生产成本低，更为绿色、环保和高效，本发明具有极大的应用意义，能为化妆品生产提供高质量的原料。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于制备短肽混合物的融合蛋白、目的多肽，短肽混合物的制备方法，以及融合蛋白、目的多肽和短肽混合物作为原料在化妆品制备中的应用。

背景技术

多肽介于氨基酸和蛋白质之间，是由一种或多种氨基酸按照一定的顺序排列通过肽键结合而成的物质。作为蛋白质的结构片段，多肽涉及生物体内各种细胞功能的生物活性。随着科研人员对多肽中各氨基酸功能和性质的不断深入了解，越来越多的活性多肽得到了充分的研究，被广泛地开发应用到医药、化妆品等领域。以多肽为主打的医药和化妆品受到了消费者的关注，其市场需求越来越多。

目前，多肽合成主要分为化学合成法、酶法和重组DNA法。化学合成法发展较为成熟，包括固相合成和液相合成，主要是以氨基酸与氨基酸之间缩合的形式来进行。该法使用的有机试剂较多，步骤复杂，生产成本较高，产生的杂质较多，分离纯化较难。使用化学合成法最为重要的缺点是，涉及合成过程中使用的大量化学试剂对于环境的不利影响。酶法主要用生物酶降解蛋白质，将动植物大分子蛋白质降解成小分子活性多肽。与化学合成法相比，酶法合成多肽的反应周期长、产率不高，难以满足工厂化生产的需要。而重组DNA法可通过合适的DNA模板来控制多肽的序列合成，产生的重组工程菌可大量高效地合成各种活性多肽。同时还具有表达定向性强、产品安全卫生、原料来源广泛和生产成本低等优点，可以得到质量高、安全卫生的多肽。考虑到商业化生产中对活性多肽的巨大需求量，重组DNA法无疑满足了生产过程简便、产品安全卫生、生产成本低等诸多要求。

GHK是一种含有三个氨基酸的活性多肽，其氨基酸序列是Gly-His-Lys。它主要存在于炎症相关蛋白和细胞外基质蛋白中(如胶原、纤维蛋白等)。有诸多研究表明，GHK能促进细胞外基质、弹性蛋白和结构蛋白等的合成，从而促进伤口的愈合和组织的再生。同时，还可以增强表皮基底细胞的分化和增殖能力，刺激核心蛋白聚糖的合成，促进血管生长和神经生长，具有一定的抗氧化和抗炎功能。另外，GHK极易与铜离子形成GHK-Cu复合物，该复合物能有效地激活胶原、硫酸皮肤素、硫酸几丁质和小分子糖蛋白、糖蛋白的合成。因此GHK、GHK-Cu复合物被广泛地应用于功能性化妆品和护肤品。GQPR是一种由四个氨基酸组成的活性多肽，其氨基酸序列为Gly-Gln-Pro-Arg。它是免疫球蛋白IgG中的活性片段，能显著降低细胞中炎症因子IL-6的水平。有研究表明，GQPR可以延缓和抑制过量白介素的生成，从而抑制一些不必要的炎症反应和糖基化损伤。在照射紫外线后受损的细胞中，这种抑制白介素产生的效应更加明显，得益于其显著的抑制炎症因子的作用，GQPR 能改善淋巴循环、促进胶原蛋白生成，阻止弹力蛋白流失，还能提高皮肤的紧致和弹力，减轻皱纹的加深，使皮肤恢复活力状态。因此GQPR在护肤品和化妆品行业得到了广泛的关注和应用。