[发明专利]光可断裂的荧光标记化合物及用途

权利要求书

1.一种光可断裂的荧光标记化合物，其特征在于，其结构式如式(I)所示：

其中，

R₁选自H、单磷酸盐、二磷酸盐和三磷酸盐中的至少一种，

R₂为H或者OH，

碱基选自胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和其衍生物中的至少一种，

连接单元包含中的至少一种。

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，式(I)中的光可断裂基团选自2-硝基甲苯基、苄氧羰基、硝基苯基、苯甲酰甲酯基酯、苄胺、苄醚、氨基甲酸2-(邻硝基苯基)乙酯和碳酸2-(邻硝基苯基)乙酯中的至少一种。

3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，式(I)中的荧光基团选自氟硼荧染料、荧光素、罗丹明、香豆素、呫吨、花青、芘、酞菁、alexa系列染料、squarene染料及其衍生物中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为结构式如式(1)～(10)所示的化合物中的至少一种：

式(1)～(10)中的Dye表示所述荧光基团。

5.一种制备权利要求1-4任一化合物的方法，所述方法包括以下A和/或B步骤：

步骤A：

将化合物(a)和反应，以获得所述光可断裂的荧光标记化合物，所述化合物(a)为：

步骤B：

将化合物(b)和反应，以获得所述光可断裂的荧光标记化合物，所述化合物(b)为：

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括A步骤，所述化合物(a)与的摩尔比为1:2～4；

任选的，所述方法包括B步骤，所述化合物(b)与的摩尔比为1:2～4；

任选的，利用步骤A制备得的光可断裂的荧光标记化合物的连接单元包含

任选的，利用步骤B制备得的光可断裂的荧光标记化合物的连接单元包含

任选的，步骤A中，所述化合物(a)选自下述化合物(11)-(15)中的至少一种：

任选的，步骤B中，所述化合物(b)选自下述化合物(16)-(20)中的至少一种：

7.一种对核酸的测序方法，其特征在于，包括如下步骤：

(i)利用芯片对第一核酸进行捕获，所述芯片为表面带有第二核酸的固体基底，以获得第一核酸-第二核酸复合物；

(ii)混合所述第一核酸-第二核酸复合物、聚合酶以及一种或多种类型的标记的底物，以获得核酸聚合产物，所述标记的底物为权利要求1-4任一化合物，不同类型的标记的底物带有不同的碱基；

(iii)对所述核酸聚合产物进行成像，以确定所述核酸聚合产物中引入的标记的底物的类型；

(iv)使所述核酸聚合物暴露于光源下，以使所述核酸聚合物中的引入的标记的底物中的下式部分发生断裂：

获得延伸产物；和

(v)以所述延伸产物替代所述第一核酸-第二核酸复合物重复进行(ii)至(iv)一次或多次以确定所述核酸的至少一部分序列。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的聚合酶选自逆转录酶、末端转移酶和DNA聚合中的至少一种；

任选的，在步骤ii后，清洗所述核酸聚合产物；

任选的，在步骤iv后，清洗所述延伸产物；

任选的，在步骤iii前，对所述第一核酸-第二核酸复合物加帽。

9.如权利要求1-4任一所述的化合物在DNA和/或RNA测序中的用途。

10.一种测序试剂盒，其特征在于，包括一种或多种如权利要求1-4任一所述的化合物。