[发明专利]一种快速环保检测葡萄酒中氨基甲酸乙酯的方法

说明书

本发明公开了一种快速环保检测葡萄酒中氨基甲酸乙酯的方法，该方法包括以下步骤：先制备含内标氨基甲酸乙酯‑D5(EC‑D5)的待测试样和不同浓度的氨基甲酸乙酯(EC)标准溶液，然后利用基质改良剂改善萃取环境对其影响，分别对待测样本和待测标样进行萃取并进行GC‑MS测定，用EC标准溶液与内标浓度比‑EC标准溶液与内标色谱峰面积比作出标准工作曲线；最后通过GC‑MS测定出的测得待测样本中的氨基甲酸乙酯与内标的色谱峰面积比，带入标准曲线计算，获得葡萄酒样品中氨基甲酸乙酯的浓度。本发明通过基质改良剂改变萃取的基质环境，减少基质干扰，缩短萃取时间，提高检测灵敏度，同时该方法环保经济，能够在1个小时内获得准确的检测结果。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种快速环保检测葡萄酒中氨基甲酸乙酯的方法。

背景技术

氨基甲酸乙酯(EC)，又称尿烷，分子式为(H₂NCOOC₂H₅)，无色无臭晶体或白色结晶粉末，易溶于水，半挥发极性化合物。自从上世纪80年代加拿大报道了一些发酵酒中EC含量较高开始，对于酒精饮料中的EC污染及其对人类健康威胁的研究越来越多，葡萄酒和中国黄酒中均有不同程度的EC污染，同时研究发现这些发酵酒中的EC污染是在发酵过程和贮藏过程中以多种方式伴随产生的，研究表明EC具有遗传性毒性和多位点致癌性，可能导致肺癌，皮肤癌，淋巴癌，肝癌等疾病。国际癌症研究机构(International Agency forResearch on Cancer，IARC)于2007年重新评估EC的致癌性后，将其列为2A组物质(“可能对人类有致癌作用”)，值得注意的是酒精饮料，其中的乙醇会协同增强EC对人类的致癌风险，建议酒精饮料的EC日均摄入量不超过80ng/kg mb。

由于文化和生活习惯，葡萄酒一直都是倍受欢迎的消费品。面对葡萄酒中EC的潜在威胁，美国将EC的最高残留量(MRL)设为15ng/mL。为了更好地研究发酵食品中的痕量EC，检测技术至关重要，已有研究表明荧光免疫分析法，高效液相色谱荧光检测器法(HPLC-FLD)，超高效液相色谱-质谱法，气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和气相色谱氮磷检测器法(GC-NPD)等方法在对不同基质食品中EC的检测有着很好的运用。但是，葡萄酒中的EC是痕量物质，且葡萄酒基质复杂，一些极性化合物的出现会对检测灵敏度和准确度产生干扰，因此针对EC前处理技术的研究成为热点，目前使用GC-MS为主的前处理方法分为液液萃取法(LLE)，乙醇－K2HPO4－H2O双水相体系萃取法，固相萃取法(SPE)，固相微萃取法(SPME)，多次顶空固相萃取法(MHS-SPME)，填充吸附微萃取法(MEPS)等，经实践发现，SPE法和LLE法方法成熟，准确度高，已被检测机构广泛使用，SPME法虽然环保高效，但因其价格昂贵，萃取纤维头有记忆效应及寿命短的弊端，在定量和检测限方面不如SPE法和LLE法，但是除了SPME法，上述方法共同有着一个容易被忽略的问题—我们在检测这些污染物的同时，大量有机溶剂的使用也在时刻污染着环境，危害着检测人员的健康，甚至超过了EC本身的危害。因此本研究在方法选择上使用近几年发展迅速的单滴微萃取法(SDME)，该方法具有简单，高效，溶剂使用量少，富集倍数高，易与色谱与质谱联用等优势，已在农药残留和环境痕量污染物方面广泛应用。目前尚未见相关SDME技术在葡萄酒，中国黄酒，面包等食品中EC检测的应用。

单滴微萃取技术背景

本研究以环保节能和科学高效理念为出发点，研究单滴微萃取联用GC-MS法对葡萄酒中EC含量进行检测，由于在知网，万方，维普，谷歌学术等中外期刊数据库未检索到相关单滴微萃取技术对氨基甲酸乙酯的萃取。因此本研究的前期工作以该项技术原理中最基础的两种形式——顶空单滴微萃取法(HS-SDME)和直接浸入式单滴微萃取法(DI-SDME)进行预实验，在查阅总结现有相关技术文献时发现，该技术结合气相或气相色谱质谱联用，适用的目标化合物需具备水不溶或水溶性差、非极性或弱极性、易挥发或半挥发等性质，而使用的萃取液滴也需要具备蒸气压低、有一定黏度、不易挥发、水不溶或微溶、与目标物极性相似等性质。