[发明专利]一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法及其在DNA折纸术中的应用

权利要求书

1.一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法，其特征在于，具体操作步骤如下：

(1.1)、构建含有核酸适配体序列的环状双链重组噬菌粒；

(1.2)、将构建的环状双链重组噬菌粒转化大肠杆菌感受态细胞；提取具有核酸适配体整合的环状单链DNA。

2.根据权利要求1所述的一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法，其特征在于，在所述步骤(1.1)中，

构建含有核酸适配体序列的环状双链重组噬菌粒的具体操作方法如下：

首先，通过使用化学合成得到选定的核酸适配体片段，以重叠PCR的方式将核酸适配体片段连接到M13mp18 RF DNA载体中选定区域的DNA片段上；

然后，通过Gibson组装的方式将选定区域的DNA片段插入到M13mp18 RF DNA载体中，用以替换该区域原有的DNA片段，并进行基因测序验证，得到正确插入核酸适配体序列的重组M13mp18噬菌粒。

3.根据权利要求1所述的一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法，其特征在于，在所述步骤(1.2)中，将构建的环状双链重组噬菌粒转化大肠杆菌感受态细胞具体如下：

首先，将经测序验证的正确插入核酸适配体序列的重组M13mp18噬菌粒转化大肠杆菌感受态细胞，并且在大肠杆菌体内进行复制；

然后，通过蓝白斑筛选的方式，挑取单个白色噬菌斑至含有2×YT培养基的试管中，并在37℃下以220rpm振荡培养过夜；12小时后，取1mL培养好的细胞转接到含有100mL 2×YT培养基的三角瓶中，并在37℃下继续培养6-8h；从而得到大肠杆菌和噬菌体大量增殖后的培养液，将其搁置待用。

4.根据权利要求1所述的一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法，其特征在于，在所述步骤(1.2)中，提取核酸适配体整合的环状单链DNA的具体操作方法如下：

首先，将大肠杆菌和噬菌体大量增殖后的培养液转移至离心管中，以10,000rpm离心15min；收集上清培养液放置于冰上待用；

然后，向上清培养液中加入终浓度分别为4.0％的PEG8000以及3.0％的NaCl，冰浴30min以上使噬菌体充分沉淀；继续在4℃下以10,000rpm离心30min收集噬菌体；

最后，加入TE缓冲液重悬噬菌体；噬菌体悬液通过苯酚氯仿抽提单链DNA，并通过无水乙醇进行沉淀，所述沉淀即为提取核酸适配体整合的环状单链DNA。

5.如权利要求1至4任意一项所述获得的一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法及利用该方法制备的核酸适配体整合的环状单链DNA在DNA折纸术中的应用。