[发明专利]一种改良猪肌内脂肪含量的PABPN1分子标记育种方法及其应用

说明书

一种改良猪肌内脂肪含量的PABPN1分子标记育种方法及其应用，它涉及分子遗传学领域，本发明通过筛选出猪PABPN1基因分子标记，建立猪分子标记辅助育种方法，为猪肌内脂肪含量遗传改良提供基因标记和技术方法。本发明依据PABPN1 5’调控区‑719位点存在C到A的突变，通过荧光素酶报告基因检测系统发现，将‑719位点C定点突变成A后其启动子活性显著降低，与肌内脂肪含量高的民猪PABPN1基因mRNA表达量低相一致。通过检测猪基因组中PABPN1调控区该‑719位点的基因型可以作为与猪肌内脂肪含量相关的分子标记，不仅方法简便快速，而且不受环境影响，并可实现早期选种。本发明应用于育种领域。

技术领域

本发明涉及分子遗传学领域，具体涉及了一种提高猪肌内脂肪含量的育种方法。

背景技术

我国是世界猪肉生产和消费第一大国，猪肉是我国人民的主体肉食，约占肉类消费总量的50～60％。随着人们生活水平的提高和经济条件的改善，人们对饮食的要求发生了改变：从之前的“吃饱”转变到了现在的“吃好”，改良肉质、生产优质猪肉已成为养猪业亟待解决的重要问题。肌内脂肪是评价猪肉品质的一个重要指标，其含量决定着肉质优劣，增加肌内脂肪含量能够改善肉的颜色、嫩度、风味和多汁性，提高口感。因此，肌内脂肪性状的遗传改良是当前猪遗传育种工作者研究的重点。

现有研究表明，肌内脂肪是多基因决定的复杂数量性状(Quintanilla et al.,2011)，其含量与猪群的遗传背景密切相关，在品种间甚至品种内品系间存在着显著差异。民猪是生长于我国东北地区的优良地方猪种，肌内脂肪含量显著高于引进的瘦肉型猪种(大白、长白)，肉质优良、鲜嫩多汁。本研究团队利用基因组重测序技术比较了民猪和大白猪的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)，发现民猪多态性丰富，并且存在着大量特有的SNPs，为进一步分析民猪优良特性的分子基础提供了基础。

发明内容

本发明通过筛选出猪PABPN1基因分子标记，建立猪分子标记辅助育种方法，为猪肌内脂肪含量遗传改良提供基因标记和技术方法。通过判断猪PABPN1基因5’调控区突变位点的多态性来进行选种，并人为地应用该突变位点实现高抗病性猪的育种。具体为该方法是基于SNP位点开发的，该方法是通过检测猪基因组中PABPN1调控区-719位点的基因型实现的，选择出PABPN1调控区-719位点的基因为A的猪，即为筛选出的目标，对该目标猪进行育种，即完成所述的改良猪肌内脂肪含量的PABPN1分子标记育种。

本发明基于所述的SNP位点开发的检测方法为PCR产物直接测序法。

本发明用于将权利要求1所述的SNP位点进行基因分型的引物对，所述的引物序列如下所示：

PABPN1_F0：AAAAGGACTGACTGCATGTAGAGG；

PABPN1_R1：GGCGAGCTAGGAGTCCATT；

本发明的基于所述的SNP位点开发的检测方法的应用，它用于猪育种。

多聚腺嘌呤结合蛋白核1(polyA binding protein nuclear 1,PABPN1)基因在生命活动中发挥着重要作用，本发明以肌内脂肪含量具有明显差异的民猪和大白猪的背最长肌、以及民猪的背最长肌和半腱肌为实验材料(Liu et al.2017)，通过高通量测序在转录组水平比较分析了差异表达基因，鉴定肌内脂肪候选基因，发现PABPN1基因的表达量存在着差异，且在前脂肪细胞分化过程中PABPN1的表达量降低，提示着PABPN1在肌内脂肪形成中发挥着重要作用。

本发明通过进一步的实验发现猪PABPN1 5’调控区-719位点的C到A突变在体外试验中改变了PABPN1启动子的活性，两者差异显著，可见检测与突变相关联的分子标记不仅方法简便快速，而且不受环境影响，并可实现早期选种。通过对民猪和大白猪PABPN1基因5’调控区的对比，找到5处核苷酸序列的不同。