[发明专利]一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法

权利要求书

1.一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，通过以MOFs材料为载体，以ALN为骨靶向配体，以HA为主动靶向配体，包载蛋白质药物，构筑一种递送蛋白质药物的骨靶向MOFs纳米载体。

2.根据权利要求书1所述的一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，所述MOFs纳米粒包括MOF纳米粒、MOF-Cyt C纳米粒、HA@MOF-Cyt C纳米粒和ALN-HA@MOF-Cyt C纳米粒。

3.根据权利要求书2所述的一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法的操作步骤包括：

S1、通过酰胺化反应制备骨靶向聚合物ALN-PEG-HA和非骨靶向聚合物CH3O-PEG-HA；

S2、一锅法制备MOFs纳米粒

利用HA所带有的-COOH与Zn²⁺通过静电结合以及配位作用的方式包裹在MOFs纳米粒的表面，制备出HA@MOF-Cyt C纳米粒和ALN-HA@Cyt C纳米粒；

S3、优化MOFs纳米粒的制备条件

设置制备液的不同浓度梯度，通过实验对比，筛选出MOFs纳米粒的最佳制备条件；

S4、观测记录并对纳米粒的包封率和载药量进行测定

S5、不同MOFs纳米粒的体外骨靶向性研究

S51、MOFs纳米粒表面包裹发光材料，用于追踪；

S52、采用离体骨片吸附实验考查MOFs纳米粒的体外骨靶向性能；

S6、MOFs相关纳米粒的组织相容性考察

以A549细胞为模型，将MOF、HA@MOF和ALN-HA@MOF与A549细胞共孵育48h，进行相容性考察；

S7、MOFs纳米粒体外药效学研究

取A549细胞孵育培养，吸取培养液，加入不同浓度的Cyt C,MOF-Cyt C、HA@MOF-Cyt C和ALN-HA@MOF-Cyt C溶液，设置纯培养液组为阴性对照组，无细胞组为空白对照组，检测并计算细胞存活率；

S8、A549细胞对MOFs纳米粒摄取的观察

观察培养瓶中的A549细胞状态；

对培养瓶中的细胞清洗、消化、吹打制成单细胞悬液；

给药前观察、洗涤和预处理；

加入FITC-BSA、MOF-FITC-BSA、HA@MOF-FITC-BSA和ALN-HA@MOF-FITC-BSA溶液孵育；

固定清洗细胞，加入Hoechst染细胞核，显微镜观察。

4.根据权利要求书3所述的一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，所述ALN-PEG-HA的制备包括以下步骤：

S11、ALN在弱碱性的条件下与COOH-PEG-NH2反应生成ALN-PEG-NH2；

S12、将步骤S11的产物ALN-PEG-NH2中的氨基与HA中的羧基发生酰胺化反应生成ALN-PEG-HA。

5.根据权利要求书3所述的一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中MOFs纳米粒的最佳制备条件为：有机配体的浓度为1.5-5.5mM、蛋白浓度为0.05-0.5mg/mL和HA浓度为0.1-0.5mg/mL。

6.根据权利要求书3所述的一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，所述MOF纳米粒呈现类六边形的形貌，MOF-Cyt C纳米粒呈现类多边形的形貌，以ALN-HA@MOF-Cyt C为代表的经HA修饰的纳米粒呈现出不规则球形的形貌，TEM粒径均小于100nm。

7.根据权利要求书3所述的一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S6中MOFs材料的体外生物相容性考察采用MT法。

8.根据权利要求书3所述的一种递送蛋白药物的骨靶向MOFs纳米递药载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S7中MOFs纳米粒体外药效学研究采用MTT法。