[发明专利]手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法在审
| 申请号： | 202110427853.3 | 申请日： | 2021-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN113061572A | 公开（公告）日： | 2021-07-02 |
| 发明（设计）人： | 吕玲燕;吴柱月;肖正中;孙俊丽;张冰;谢炳坤;张家庆;王献伟;孙如玉;汪燕玲;关志惠;潘星辰 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区畜牧研究所 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N13/00 |
| 代理公司： | 广西中知科创知识产权代理有限公司 45130 | 代理人： | 汤凌志 |
| 地址： | 530001 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 手工 克隆 程序 透明 胚胎 培养 改进 方法 | ||
1.手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)扎穴前先在四孔板内加入胚胎培养液，按要求扎成如下参数的3组微穴：
组1参数：底部直径为120±10μm，上口直径约150±10μm，深度为1500±10μm；
组2参数：底部直径为120±10μm，上口直径约200±10μm，深度为200±10μm；
组3参数：底部直径为150±10μm，上口直径约200±10μm，深度为200±10μm；
2)扎穴后四孔板内的液体全部倒掉，倒扣4-6分钟，确保微穴内液体全部倒出；
3)往微穴内加入0.15-0.25mg/mL的植物凝集素，确保填满微穴，浸泡8-12分钟，随后往四孔板内无微穴的位置缓慢加入胚胎培养液，最后覆盖一层石蜡油。
2.根据权利要求1所述的手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：步骤1)所述的按要求扎成如下参数的3组微穴，是：
组1参数：底部直径为120μm，上口直径约150μm，深度为150μm；
组2参数：底部直径为120μm，上口直径约200μm，深度为200μm；
组3参数：底部直径为150μm，上口直径约200μm，深度为200μm。
3.根据权利要求1所述的手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：步骤1)所述胚胎培养液，包括以下浓度的成分：6.31g/LNaCl、0.74g/LKCl、0.047g/LKH2PO4、2.1g/LNaHCO3、0.022g/L丙酮酸钠、0.62g/L乳酸钙、0.15g/L L-谷氨酰胺、0.55g/L亚牛磺酸、20ml/L必需氨基酸、10ml/L非必需氨基酸、0.065g/L青霉素、0.05g/L链霉素、4g/L胎牛血清白蛋白。
4.根据权利要求1所述的手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：步骤2)所述的倒扣，时间是5分钟。
5.根据权利要求1所述的手工克隆程序中无透明带胚胎培养的微穴改进方法，其特征在于：步骤3)所述的浸泡，时间10分钟。
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