[发明专利]一种真菌细胞阳性蜡块及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种真菌细胞阳性蜡块及其制备方法和应用。所述制备方法，包括培养真菌，将真菌加入液态培养基中培养，待真菌细胞培养达到预定数量后，加入固定剂进行固定并灭活；制作真菌细胞阳性蜡块，在灭活后的溶液中加入对比细胞，混匀后离心，除去上清液得到沉淀物，加入液态琼脂，混匀后冷却凝固，加入固定剂进行固定，脱水、包埋，即得。液态培养基既能给真菌提供营养，又为后续使用琼脂作为介质制作细胞蜡块提供了便捷条件；加入对比细胞能使真菌散落在细胞和细胞团之中，在显微镜下观察真菌效果与检测组织更为接近，同时对比细胞可作为真菌染色的背景衬染，使真菌与背景对比清晰，更容易观察，制作方法简单容易操作，实用性强。

技术领域

本发明涉及病理学技术领域，特别是涉及一种真菌细胞阳性蜡块及其制备方法和应用。

背景技术

真菌也称霉菌，广泛存在于自然界，大部分为非致病性，少数可感染人体形成真菌病。在临床病理诊断中，如能证实真菌感染，可为临床医生对患者进行抗感染治疗提供依据。在HE切片上不容易观察到组织细胞内的真菌，通过特殊染色可以很好的显示出真菌，为真菌感染的病理诊断提供证据。

在真菌特殊染色中，如果未设置阳性对照并且检测的组织片是阴性，就很难判断是组织本身没有真菌感染还是染色操作不成功。因此，在特殊染色中，阳性对照的设立是一个十分重要的质控措施，通常的做法是在每一张待染色片中设置一个已知阳性的组织作为对照，以保证染色结果的可靠性，同时为病理医生判断组织细胞是否有真菌提供对照参考。但在日常工作中，由于真菌的阳性标本不多见或已有阳性组织太小难以留存等原因，阳性对照组织不容易获得，所以染色操作时设立阳性对照较为困难。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种真菌细胞阳性蜡块的制备方法，制备得到的真菌细胞阳性蜡块接近真实的真菌感染组织细胞结构，用于阳性对照试验观察更真实，有效地保证真菌阳性片的来源，弥补了不便从日常组织样本中存留和获取阳性对照标本的缺点,便于进行染色质量控制，从而保证染色质量。

为了达到上述目的，采用了一种真菌细胞阳性蜡块的制备方法，包括以下步骤：

培养真菌：将真菌加入液态培养基中培养，待真菌细胞培养达到预定数量后，加入固定剂进行固定并灭活；

制作真菌细胞阳性蜡块：在灭活后的溶液中加入对比细胞，混匀后离心，除去上清液得到沉淀物，加入液态琼脂，混匀后冷却凝固，加入固定剂进行固定，脱水、包埋，即得。

上述制备方法中，液态培养基能给真菌提供营养，且为后续使用琼脂作为介质制作细胞蜡块提供了便捷条件；加入对比细胞能使真菌散落在细胞和细胞团之中，在显微镜下观察真菌效果与检测组织更为接近，同时对比细胞可作为真菌染色的背景衬染，使真菌与背景对比清晰，制备得到的真菌细胞阳性蜡块接近真实的真菌感染组织细胞结构，用于阳性对照试验观察更真实，更容易观察，制作方法简单容易操作，实用性强。

在其中一个实施例中，所述液态培养基为淀粉酶溶液，浓度为1wt％-5wt％。使用上述浓度的淀粉酶溶液在适宜的温度条件下非常适合真菌生长，作为培养基培养真菌，不仅原料容易获取，且培养条件也容易达到，操作简便，效果好。

在其中一个实施例中，所述淀粉酶溶液中的淀粉酶为α-淀粉酶。所述α-淀粉酶溶液易于获取，且能满足真菌生长的营养需求。

在其中一个实施例中，所述真菌细胞和所述对比细胞的浓度比为1:1-2，所述液态琼脂和沉淀物的体积比为1:0.5-1.5。在上述条件下，真菌细胞和对比细胞的参照对比更清晰明显，更容易观察。

在其中一个实施例中，所述对比细胞为胸腹水沉淀细胞。所述胸腹水沉淀细胞常见易得，且细胞含量丰富，将真菌混杂在这些脱落细胞中，所制作出来的真菌阳性蜡块，较接近真实的真菌感染的组织细胞结构，用于阳性对照实验观察更真实。