[发明专利]3α-羟基类固醇脱氢酶、编码基因及其在催化剂中的应用

说明书

本发明提供一种新的NAD(H)依赖型3α‑羟基类固醇脱氢酶，该酶能够催化胆汁酸C3位α‑羟基的氧化反应，催化TCDCA的C3位α‑羟基氧化生成Tauro‑3‑dehydro‑CDCA，或者催化TUDCA的C3位α‑羟基氧化生成Tauro‑3‑dehydro‑UDCA，催化活性是绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)3α‑羟基类固醇脱氢酶(Accession NO.WP_003109865.1)的12.18倍和15.06倍，在临床检验中具有巨大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种3α-羟基类固醇脱氢酶、编码基因及其在催化剂中的应用。

背景技术

总胆汁酸是胆固醇在肝脏分解及肠-肝循环中的代谢产物，是胆固醇在肝脏分解代谢的最终产物，其与胆固醇的吸收、代谢及调节关系密切。血液、组织液中总胆汁酸的含量测定一直是研究的热点。目前临床检测中通常使用3α-羟基类固醇脱氢酶催化待检测样品中的胆汁酸C3羟基进行氧化反应，该反应同时将氧化型辅酶I或II还原为还原性辅酶I或II，通过测定340nm处的光吸收变化值计算得到待测样品中总胆汁酸的含量。该检测过程中，具有较高催化活性和稳定性的新酶挖掘和发现是研究的热点之一。发现活性更高的3α-羟基类固醇脱氢酶有助于试剂盒检测能力的提升和更加广泛的应用。

发明内容

根据本发明的第一方面，本发明提供一种新的3α-羟基类固醇脱氢酶，该3α-羟基类固醇脱氢酶催化TCDCA、TUDCA的C3位α-羟基氧化分别生成Tauro-3-dehydro-CDCA与Tauro-3-dehydro-UDCA，催化活性高，具有巨大的实际应用价值。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种3α-羟基类固醇脱氢酶，其序列如SEQ ID NO.1所示。

根据本发明的第二方面，本发明提供上述3α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因。

上述3α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因，其序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第三方面，提供一种表达载体，其含有上述3α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因。

一种表达载体，其含有上述3α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因。进一步的，本发明还提供一种重组菌，其被上述的表达载体转化。更进一步，经表达载体转化的重组菌选自重组大肠杆菌。

本发明的第四方面，本发明还提供一种酶蛋白表达盒，其包含上述3α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因。进一步，本发明还提供一种重组细胞，其包含上述酶蛋白表达盒。

本发明的第五方面，提供上述3α-羟基类固醇脱氢酶或3α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因在总胆汁酸含量的检测中的应用，所述应用用于非疾病的诊断和治疗。上述3α-羟基类固醇脱氢酶或3α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因在催化胆汁酸C3位α-羟基的氧化反应中的应用，所述应用用于非疾病的诊断和治疗。

本发明的第六方面，提供一种催化剂，其有效成分包含上述3α-羟基类固醇脱氢酶。

本发明的第七方面，提供一种催化胆汁酸C3位α-羟基氧化反应的方法，其特征在于：所述催化剂包含上述3α-羟基类固醇脱氢酶，所述方法用于非疾病的诊断和治疗。进一步，所述催化胆汁酸C3位α-羟基氧化反应为催化TCDCA的C3位α-羟基氧化生成Tauro-3-dehydro-CDCA或催化TUDCA的C3位α-羟基氧化生成Tauro-3-dehydro-UDCA。

有益效果：