[发明专利]同时测定血液中葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的液相色谱串联质谱方法

说明书

本发明公开了一种同时测定血液中葡萄糖、果糖和1，5‑脱氧葡萄糖醇的液相色谱串联质谱方法，包括：配制标准品混合液；配制内标物提取液；将内标物提取液加标准品混合液中，进行液相色谱串联质谱检测；根据液相色谱串联质谱检测结果分别建立葡萄糖标准曲线、果糖标准曲线和1，5‑脱氧葡萄糖醇标准曲线；将内标物提取液加入待测血液样本中，进行液相色谱串联质谱检测；将待测血液样本的检测结果分别代入葡萄糖标准曲线、果糖标准曲线和1，5‑脱氧葡萄糖醇标准曲线中，得到待测血液样本中葡萄糖浓度、果糖浓度和1，5‑脱氧葡萄糖醇浓度。本发明可准确、高通量和高灵敏度实现血液中葡萄糖、果糖和1，5‑脱氧葡萄糖醇的同时定量检测。

技术领域

本发明涉及分析检测领域。更具体地说，本发明涉及一种同时测定血液中葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的液相色谱串联质谱方法。

背景技术

糖尿病(Diabetes mellitus，DM)已经成为仅次于心血管疾病和癌症之后，人类的第三杀手，是一个全球性的严重公共卫生问题，血糖检测是糖尿病重要监测指标之一，而血清中1，5-脱氧葡萄糖醇(1，5-AG)能反映2天-2周的血糖状态，2015年《中国血糖监测临床应用指南》已经将血清1，5-AG列入辅助血糖监测的指标。此外，越来越多的研究表明，果糖水平监测也异常重要，因为大量食用果糖会导致人体肝脏合成脂肪的能力明显提升进而导致肥胖，而肥胖易引发胰岛素抵抗及非酒精脂肪肝等，这对全身代谢有着显著的负面影响。然目前只有血液中1，5-AG和葡萄糖检测的质谱方法，但是尚未报道同时监测葡萄糖、果糖和1，5-AG水平三个指标进行的质谱分析方法。因此需要建立一种可同时进行葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇准确的检测方法。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种同时测定血液中葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的液相色谱串联质谱方法，可准确、高通量和高灵敏度实现血液中葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的同时定量检测。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种同时测定血液中葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的液相色谱串联质谱方法，包括：

配制同时含葡萄糖、果糖和1，5-脱氧葡萄糖醇的标准品混合液多个，多个标准品混合液中葡萄糖浓度均不相同，多个标准品混合液中果糖浓度均不相同，且多个标准品混合液中1，5-脱氧葡萄糖醇浓度均不相同；

配制同时含¹³C₆葡萄糖、¹³C₃果糖和¹³C₆ 1，5-脱氧葡萄糖醇的内标物提取液；

将内标物提取液分别加入多个标准品混合液中，再将混有内标物提取液的多个标准品混合液分别进行液相色谱串联质谱检测；

根据混有内标物提取液的多个标准品混合液的液相色谱串联质谱检测结果分别建立葡萄糖标准曲线、果糖标准曲线和1，5-脱氧葡萄糖醇标准曲线；

将内标物提取液加入待测血液样本中，再将混有内标物提取液的待测血液样本进行液相色谱串联质谱检测；

将混有内标物提取液的待测血液样本的液相色谱串联质谱检测结果分别代入葡萄糖标准曲线、果糖标准曲线和1，5-脱氧葡萄糖醇标准曲线中，得到待测血液样本中葡萄糖浓度、果糖浓度和1，5-脱氧葡萄糖醇浓度。

优选的是，混有内标物提取液的标准品混合液先进行涡旋、离心，再取上清液进行液相色谱串联质谱检测，混有内标物提取液的待测血液样本也先进行涡旋、离心，再取上清液进行液相色谱串联质谱检测。

优选的是，涡旋时间为1～5min，离心转速为14000～16000rpm，离心温度为1～5℃，离心时间为8～12min。