[发明专利]芍药苷及芍药内酯苷在调控贝母素甲透血脑屏障中的应用

说明书

本发明属于中药有效成分应用技术领域，公开了白芍的主要成分芍药苷和芍药内酯苷在调控贝母素甲透血脑屏障的应用；经本发明试验芍药苷和芍药内酯苷可以促进血脑屏障对贝母素甲的外排，其机制与调节P‑gp表达、P‑gp ATP酶、P‑gp功能和MDR1mRNA表达有关。

技术领域

本发明涉及一种芍药苷及芍药内酯苷在调控贝母素甲透血脑屏障中的应用，属于中药有效成分技术领域。

背景技术

贝母素甲是贝母的有效成分和毒性成分，临床已有报道服用贝母后患者出现毒性反应，主要表现为意识障碍、肢体动作不自主等神经系统症状报道。白芍(Radix paeoniaealba)属于毛茛科植物，其药用历史可追随到两千年前。中医认为白芍具有养血调经、柔肝止痛等功效。中医药典籍中记载含白芍药材的古方数以百计，如乌头汤、黄芩汤、桂枝汤、炙甘草汤等。白芍含有单萜苷、三萜、鞣质、黄酮等150余种化学成分，其主要有效成分有芍药苷(Paeoniflorin)、芍药内酯苷(Alibiflorin)和没食子酸(Gallic acid)等。白芍有改善微循环自由基损伤、抗神经毒性和改善小鼠的学习记忆功能等作用。白芍活性成分芍药苷和芍药内酯苷是否可能通过P-gp调控贝母素甲的透过血脑屏障，并未进行相关研究，特别是缺乏芍药苷和芍药内酯苷在调控贝母素甲透血脑屏障的物质基础和作用机制进行研究。

发明内容

本发明提供了芍药苷和芍药内酯苷在调控贝母素甲透血脑屏障中的应用。

本发明采用MTT法检测芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲以及两者不同比例配伍在MDCK-MDR1细胞存活率,测定芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲及其配伍对MDCK-MDR1细胞的毒性，研究芍药苷、芍药内酯苷对贝母素甲跨MDCK-MDR1血脑屏障的影响。结果表明MDCK-MDR1细胞安全毒性范围为芍药苷0～1200μg/mL，芍药内酯苷0～1200μg/mL，贝母素甲0～50μg/mL。并开展了芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲各比例配伍的毒性实验，配伍后均能扩大贝母素甲的毒性范围，筛选出最佳配伍比例，为后面的实验确定浓度和比例。筛选的最佳配伍浓度及比例为：贝母素甲50μg/mL-芍药苷100μg/mL(1：2)，贝母素甲50μg/mL-芍药内酯苷50μg/mL(1：1)。芍药苷、芍药内酯苷、贝母素甲都受到P-gp蛋白外排作用的影响，芍药苷配伍贝母素甲，可显著促进贝母素甲的外排。

本发明采用Western blot技术检测芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲以及两者配伍对MDCK-MDR1细胞血脑屏障模型上P-gp表达水平的影响。结果表明，与空白组相比，芍药苷和芍药内酯苷单用对P-gp的表达有下调作用。贝母素甲对P-gp的表达无明显影响；与贝母素甲单用组对比，贝母素甲与芍药苷、贝母素甲与芍药内酯苷配伍后能显著提高P-gp的表达。

本发明应用Pgp-GloTM检测体系检测芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲以及两者配伍对MDCK-MDR1细胞血脑屏障模型上ATP酶活性的影响。结果表明，与空白比较，芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲可以诱导ATP酶活性。与贝母素甲单用比，贝母素甲与芍药苷、贝母素甲与芍药内酯苷配伍能显著提高ATP酶活性。

本发明采用流式细胞术研究芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲以及两者配伍对MDCK-MDR1细胞血脑屏障模型上细胞摄取探针药物罗丹明123(Rh123)的影响，探讨芍药苷、芍药内酯苷和贝母素甲及其两者配伍对P-糖蛋白的外排功能是否有影响。结果表明，与空白组比，芍药苷、芍药内酯苷能抑制P-gp对Rh123的外排，贝母素甲无显著性差异。与贝母素甲单用组相比，贝母素甲与芍药苷配伍、贝母素甲与芍药内酯苷配伍荧光强度均显著减少，表明配伍后细胞内Rh123蓄积明显减少，反映此配伍增强了P-gp功能，增加了P-gp对Rh123的外排。