[发明专利]流感核蛋白疫苗

说明书

本发明涉及一种融合蛋白，其包含来自流感病毒株A、B或C的核蛋白抗原的变体和C4bp寡聚化域的变体，用于增加来自流感的核蛋白抗原的细胞免疫原性。本发明还涉及核酸、载体、融合蛋白和免疫原性组合物，它们用作疫苗或免疫疗法用于预防和治疗流感疾病。

本申请是申请日为2014年3月18日，申请号为201480013364.1，发明名称为流感核蛋白疫苗的专利申请的分案申请。

背景

存在改进流感疫苗的需要。目前针对流感的疫苗策略集中在生成针对血凝素的稳固的抗体(体液的)反应。由于在一年的过程中循环流感病毒株中高度的抗原性漂移，对于每个流感季必须特定地重新配制疫苗株。虽然年度(或季度)流感疫苗对于不同年龄类别的变化程度是成功的，显然对于年幼和年老者特别需要更有效的保护。此外，存在再造病毒会进化的重大、永久的风险，其在称为“抗原性漂移”的过程中获得非常不同的HA(血凝素)基因。这会产生公共健康紧急情况，因为目前的流感疫苗基本上依赖于HA抗原。

流感病毒是病毒的正粘病毒科(Orthomyxoviridae)中一种有包膜的、单链、负链RNA病毒，分为3个主要类型A、B和C。流感A病毒感染多种多样的动物，包括人、鸟类、猪、马、蝙蝠等等，尽管任何特定的流感病毒的趋向性通常高度适应于特定宿主。流感B病毒感染较小数目的物种，即人和海豹，但仍然是年度流行性感冒的重要原因。大多数人流感感染是通过流感病毒A或B引起的；而感染人和猪的流感C病毒罕见导致严重的人感染或流行(Lamb)。

目前失活的流感病毒疫苗诱导抵御紧密相关的病毒株的抗体。目前得到许可的疫苗主要诱导针对血凝素(HA)的菌株-特异性的中和抗体，病毒表面上的主要抗原性决定簇其为高免疫原性的，并可预防由匹配病毒株的感染引起的疾病。然而，HA具有重要的抗原变异，其排除其单独用于经设计以提供光谱防护(broad protection)的疫苗。为此，针对较少可变的靶物生成保护反应的可替换的疫苗策略是非常感兴趣的。

用流感A病毒的天然感染诱导体液和细胞免疫性两者。持久的细胞免疫性主要针对保守的、内部病毒蛋白，如核蛋白(NP)。在天然感染后NP抗原在人中是免疫原性的，但诱导的细胞毒性T淋巴细胞具有短的寿命(McMichael a,McMichael b)。

针对NP的细胞免疫性是有价值的，因为其针对NP表位的不同变体，且靶向NP的DNA疫苗在动物中具有诱导的交叉-保护的免疫性(Schotsaert)。

核蛋白(NP)抗原已长期被识别为高度保守的抗原：甚至是最歧化的(divergent)流感病毒A株在它们编码的NP蛋白中共享90％同一性(Gorman,Xu)。对NP的抗原性变化是罕见的且仅仅在较小程度发生(Staneková)。

现有技术

使用核蛋白作为疫苗中的抗原

流感核蛋白用作抗原描述于1980年代(Wraith)。小鼠中针对NP的细胞免疫响应能够诱导免疫性，且能够显著地产生针对分歧的A型病毒的交叉保护。显示用由H3N2病毒纯化的NP免疫小鼠可提供免于致死性异源(H1N1)攻击的实质保护(75％)，但它不能防止感染。

使用NP基因的DNA疫苗已知20年：将它们用于第一“概念证明”实验用于DNA免疫本身(Ulmer)。

NP从病毒载体的表达首次在1980年代证明(Yewdell 1985)，且用此载体免疫与细胞毒性T淋巴细胞针对分歧的流感病毒A株而非B株与DNA疫苗相比改进的生成相关。

自此，已显示用表达PR8核蛋白的MVA载体免疫小鼠保护它们抵御异亚型流感病毒(Altstein)的低剂量攻击。更近些，已将一种编码融合于M1蛋白的NP蛋白的病毒载体用于免疫人(Lillie,Berthoud,Antrobus)。这些研究显著地显示：当体液反应通过免疫衰老(immunosenescence)下降时，对于NP的细胞免疫响应可在较年长的人中被实质地增强(Antrobus)。