[发明专利]一种酶法合成(S)-1,2,4-丁三醇的方法

权利要求书

1.一种酶法合成(S)-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于：包括，

在pH6.0~7.0的磷酸钾缓冲液中，添加1,4-二羟基-2-丁酮、氢供体、辅酶、酮还原酶和葡萄糖脱氢酶组成反应混合液，在25~35℃下进行反应16~24h，生成(S)-1,2,4-丁三醇；其中，

所述氢供体为葡萄糖；

所述辅酶为NAD⁺；

所述酮还原酶，其基因碱基序列如SEQ ID No.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述反应混合液中，1,4-二羟基-2-丁酮浓度为100g/L，氢供体浓度为120 g/L，葡萄糖脱氢酶浓度为4g/L，辅酶浓度为0.2 g/L。

2.如权利要求1所述酶法合成(S)-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于：所述酮还原酶，其制备方法，包括，

制备包含基因碱基序列如SEQ ID No.1所示的酮还原酶重组表达载体，将所得还原酶重组表达载体转化至宿主微生物中制得的异源表达菌株，即获得酮还原酶重组表达转化体；

将所述酮还原酶重组表达转化体接种至含卡那霉素的LB试管培养基中，37℃活化培养12 h；

按1%接种量转接活化培养物至400 mL含卡那霉素的LB液体培养基中，37℃培养菌体浓度A600至0.6~0.8，加入异丙基硫代半乳糖苷IPTG，终浓度0.1 mmol/L，于25℃诱导培养16h，离心收集菌体，即得含重组酮还原酶的湿菌体。

3.如权利要求2所述酶法合成(S)-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于：所述反应混合液，其中，酮还原酶为表达酮还原酶的湿菌体，其浓度为20~80 g/L。