[发明专利]一种防污染检测管和基于其的CRISPR分子诊断检测方法

权利要求书

1.一种防污染检测管，其特征在于，包括扩增内管（3），扩增内管（3）外部套设有检测外管（5），扩增内管（3）内部设有裂解内管（4），扩增内管（3）顶部设有管帽（1）；

其中，裂解内管（4）包括底部设置的裂解内管密封薄膜（6），扩增内管（3）包括底部设置的扩增内管密封薄膜（7）；管帽（1）包括管帽本体，管帽柱体上设有按压回弹部，管帽本体内部设有管针（2），管针（2）与按压回弹部固定连接；

裂解内管（4）、扩增内管（3）、检测外管（5）和管帽（1）之间依次通过螺纹配合连接；

管帽柱体上设有用于卡固限位的外檐结构，按压回弹部设置于管帽柱体上部；

扩增内管（3）包括固定连接的第一空心圆柱体上部和第一类锥形下部，第一类锥形下部的收口侧设有开口，扩增内管密封薄膜（7）设于所述开口进行密封；

检测外管（5）包括固定连接的第二空心圆柱上体和底部封闭的第二类锥形下体；

裂解内管（4）包括第三空心圆柱体，裂解内管密封薄膜（6）设于第三空心圆柱体底部进行密封；

按压回弹部为聚烯烃弹力套筒，管针（2）尾部与聚烯烃弹力套筒底部内侧面固定连接；

裂解内管（4）、扩增内管（3）、检测外管（5）和管帽（1）之间依次通过过盈配合连接；

裂解内管密封薄膜（6）和扩增内管密封薄膜（7）均为聚烯烃薄膜；

裂解内管密封薄膜（6）的薄膜厚度为50~100µm，扩增内管密封薄膜（7）的薄膜厚度为50~100µm；

所述防污染检测管的检测方法，包括以下步骤：

1）将CRISPR试剂冻干置于检测外管（5）后，将扩增内管（3）固定于检测外管（5）中上部；将核酸扩增试剂干粉置于扩增内管（3）后，将裂解内管（4）固定于扩增内管（3）中部；将核酸裂解试剂置于裂解内管（4）后，盖上管帽（1）；得到待检测试剂管；

2）打开管帽（1），将待检测的样本核酸加入步骤1）所得待检测试剂管的裂解内管（4）中；盖上管帽（1），在恒温环境中进行待检测的样本核酸的核酸裂解反应的程序；

3）核酸裂解反应结束后，按压管帽（1）、使管针（2）刺穿裂解内管密封薄膜（6），经一阶段离心，进行核酸扩增反应的程序；

4）核酸扩增反应结束后，按压管帽（1）、使管针（2）刺穿扩增内管密封薄膜（7），经二阶段离心，核酸检测反应的程序；

5）最后通过UV灯照射得到CRISPR分子诊断的检测结果；

所述核酸裂解反应的恒温环境为37℃~40℃，时间为10~20min；

步骤3）中，核酸扩增反应的温度为37℃~40℃，时间为10~20min；

步骤4）中，核酸检测反应的温度为37℃~40℃，时间为15~20min；

步骤3）中，一阶段离心的转速为600~6000rpm，一阶段离心的时间为5~20s；

步骤4）中，二阶段离心的转速为600~6000rpm，二阶段离心的时间为5~20s；

步骤3）中和步骤4）中，管帽（1）的按压时间为2~7s。

2.根据权利要求1所述的一种防污染检测管，其特征在于，将步骤1）所得待检测试剂管直接保存，用于CRISPR分子诊断的直接检测取用。