[发明专利]一种类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定图谱数据库以及类鼻疽伯克霍尔德菌快速鉴定方法

说明书

本发明提供一种类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定图谱数据库以及类鼻疽伯克霍尔德菌快速鉴定方法，所述数据库中包含类鼻疽伯克霍尔德菌的分子量2000～20000的蛋白质图谱，所述蛋白质图谱由不同分子量蛋白质的质何比及其相对强度绘制而成；本发明还公开了图谱中共38个特征峰数据。本发明公开的类鼻疽伯克霍尔德菌快速鉴定方法，包括以下步骤：1)将检测细菌接种于平板，接种好的平板置于35～37℃恒温箱培养20～48h；2)挑取平板上的单个菌落，涂靶板，菌膜晾干后立即加基质液，晾干后采用MALDI‑TOF MS检测；所得图谱与数据库中的图谱进行比对，Log(score)≥2.0时，判为阳性。采用本发明图谱数据库及快速鉴定方法，类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定准确率达到99.9％以上，实现了类鼻疽伯克霍尔德菌的快速准确鉴定。

技术领域

本发明涉及细菌鉴定技术领域，特别涉及一种类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定图谱数据库以及类鼻疽伯克霍尔德菌快速鉴定方法。

背景技术

类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei，BP)的自然疫源地主要在热带和亚热带地区，我国的类鼻疽流行区域主要在南方地区，以热带海南最为多见，具有多重耐药、易播散、感染症状不典型等特点，已成为海南热带地区多发病、常见病，相关文献报道其病死率达90％，随着抗生素的发展和检验技术的进步，病死率仍然高达60％；其中热带海南BP分离率最高，BP将可能成为一类新兴热带病。快速诊断BP感染是治疗和预防类鼻疽病的关键，而常规生化鉴定结果不准确，会导致错报和漏报。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF MS)技术，是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。用MALDI-TOF MS技术对病原菌鉴定比其他方法更快速、方便、准确，也更加的节约成本。MALDI-TOF-MS技术在单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)及植物病原菌的快速鉴定方面取得了良好的应用效果。例如专利申请公布号CN104833803B公开一种豆类植物病原菌的多重检测方法及数据库，其公开数据库图谱信息，利用构建的数据库对豆类7种重要病原菌进行检测。该方法实现的是植物病原菌的鉴定。细菌蛋白主要取决于细菌自身的遗传因素，因此对于不同菌种的检测结果不同。也有文献《3种方法对鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定》证实MALDI-TOF-MS可用于BP的鉴定。该文献将待检菌株与自建的病原菌蛋白指纹图谱数据库进行比对，该文献没有公开其自建的图谱数据库数据，检测准确率也有待提高。

MALDI-TOF-MS技术以细菌菌体蛋白为检测对象，其鉴定结果的准确性受到数据库中的蛋白指纹图谱影响。目前对于MALDI-TOF-MS用于BP鉴定的相关研究较少，且缺乏相应的标准蛋白质图谱数据库。这大大制约了MALDI-TOF-MS技术在临床BP鉴定的应用。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明提出一种类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定图谱数据库以及类鼻疽伯克霍尔德菌快速鉴定方法。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种类鼻疽伯克霍尔德菌鉴定图谱数据库，所述数据库中包含类鼻疽伯克霍尔德菌的分子量2000～20000的蛋白质图谱，所述蛋白质图谱由不同分子量蛋白质的质何比及其相对强度绘制而成；

分子量2000～3000的蛋白质，有3个特征峰，质荷比分别为：2190.8179，2697.1714，2840.8544；