[发明专利]一种对HPV16E6蛋白具有结合亲和力的多肽及其应用

说明书

本发明以葡萄球菌A蛋白的Z结构域作为支架，将其表面氨基酸残基模拟抗体结合位点进行随机突变，通过噬菌体展示技术构建突变文库，以HPV16E6作为靶抗原对该文库进行亲和筛选，经过大量的筛选工作，最终获得了对于HPV16E6具有高度亲和力的多肽，经过深入的研究，本发明首次揭示了一种对HPV16的E6蛋白具有结合亲和力的多肽，此外本发明还提供了该多肽作为药物或分子靶向试剂的诊断或治疗用途。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地，本发明涉及一种对HPV16E6蛋白具有结合亲和力的多肽及其应用。

背景技术

宫颈癌是全球妇女癌症相关死亡的第二大常见原因。据报道每年新增病例达到445,000 例，其中约有270,000人死亡。来自临床，流行病学和分子生物学数据的研究已经证实超过 95％的宫颈癌患者与高危型人乳头瘤病毒(HPVs)的感染，研究表明，持续性感染高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)，包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58和59型，是宫颈癌发生发展的主要致病原因。其中，HPV16和HPV18是最普遍的基因型，分别约占宫颈肿瘤的62.6％和15.7％。

HPV是一种无包膜，双链，环状的DNA病毒。它的基因组由约8000个碱基对组成，其基因组分为3个区：E区、L区和非编码区(UCR)，E区含8个早期开放阅读框ORF(F1～E8)，分别编码 F1～E8早期蛋白，参与病毒DNA的复制、转录、翻译调控和转化等功能；L区含2个晚期开放阅读框ORF(L1、L2)，编码主要结构蛋白L1和次要结构蛋白L2。大量研究表明HPV基因组整合到宿主染色体中，导致病毒E2基因破坏和E6/E7致癌基因的持续表达，这是宫颈癌发生的关键事件。E6蛋白是一种多功能蛋白，其中最重要的功能是介导p53蛋白的降解，导致p53抑制细胞生长增殖作用减弱甚至消失，引起肿瘤恶性进展。E7蛋白通过靶向pRb诱导细胞转化，从而促进宫颈癌的发生。E6/E7癌蛋白还可以通过靶向多个信号分子，进而调节对恶性转化同样重要的不同信号传导途径。因此，仅在HPV感染组织中特异性表达的E6/E7癌蛋白是HPV相关肿瘤早期诊断和治疗的理想分子靶点。

宫颈癌疫苗成功上市后对控制宫颈癌起到了积极的预防作用，但是，已经感染了HPV及其所致的癌前病变、复发与转移等，至今仍没有特异的靶向治疗方法。宫颈癌主要采用手术治疗，同时辅以放疗和化疗，而很大部分癌症患者因自身免疫系统及身体耐受情况较差，产生严重的毒副作用，从而更危及患者生命，成为癌症死亡率高的一个重要因素。靶向治疗具有选择性高效性杀伤肿瘤细胞，避免损伤正常组织，是目前肿瘤治疗中最具希望的方法和策略。目前，西妥昔单抗和舒尼替尼等单克隆抗体在肿瘤患者的治疗中已经产生了令人印象深刻的癌症控制效果。但基于抗体分子的靶向治疗仍然存在其应用的局限性，如渗透性差、成本昂贵、具有较强的免疫原性和毒副反应严重等有待进一步研究改善。尤其毒副作用产生的毒性效应已经成为发展针对肿瘤治疗性抗体的主要障碍，产生肝、肾及神经系统毒性而使其功能降低。

基于上述说明，本领域仍然亟待研究靶向性治疗HPV感染及其相关肿瘤的新药物或新方法，以改善目前临床现状。。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对HPV16E6具有结合亲和力的多肽及其应用。

在本发明的第一方面，提供一种对HPV16E6蛋白具有结合亲和力的多肽，该多肽是以葡萄球菌A蛋白(SPA)Z段(Z结构域)的氨基酸序列作为骨架，进行12-20个氨基酸变异后获得的多肽，所述的对HPV16E6蛋白具有结合亲和力的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2-4任一所示。

在另一优选例中，所述的对HPV16E6蛋白具有结合亲和力的多肽与HPV16E6蛋白相互作用的KD值为1×10^-5M至1×10^-7M。