[发明专利]一种酸性蛋白酶高效表达的方法及其应用有效
| 申请号： | 202110436308.0 | 申请日： | 2021-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN112920280B | 公开（公告）日： | 2022-07-05 |
| 发明（设计）人： | 吴丹;郑璞;陈鹏程;魏梦园 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N9/58;C12N9/64;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;C12G1/022;C12R1/84;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 酸性 蛋白酶 高效 表达 方法 及其 应用 | ||
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为N端连接有增强型α-信号肽的酸性蛋白酶；所述酸性蛋白酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述增强型α-信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.表达权利要求1所述融合蛋白的载体。
3.含有权利要求1所述融合蛋白或权利要求2所述载体的重组菌株。
4.如权利要求3所述的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株以毕赤酵母为宿主，以pPIC9K为载体。
5.如权利要求4所述的重组菌株，其特征在于，所述毕赤酵母包括Pichia.pastorisGS115、KM71和X33。
6.一种构建权利要求3所述重组菌株的方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下所示：(1)将酸性蛋白酶和增强型α-信号肽连接并插入到表达载体pUC57中，获得重组载体pUC57-enα-SP-acidprotea；(2)以步骤(1)中的重组载体pUC57-enα-SP-acidprotea为模板，扩增含有酸性蛋白酶和增强型α-信号肽的目的片段并插入到表达载体pPIC9K，获得重组载体pPIC9K-en-αSP-acidprotea；(3)线性化步骤(2)中的重组载体并转化至毕赤酵母，获得重组菌株。
7.一种提高酸性蛋白酶表达量的方法，其特征在于，所述方法为：在酸性蛋白酶基因序列的N端连接增强型α-信号肽的基因序列；所述增强型α-信号肽的核苷酸序列如SEQ IDNO.4；所述酸性蛋白酶包括动物源或真菌源的酸性蛋白酶；所述酸性蛋白酶的序列如SEQID NO.2所示。
8.权利要求1所述的融合蛋白或权利要求3所述的重组菌株在分解酪蛋白方面的应用。
9.权利要求1所述的融合蛋白或权利要求3所述的重组菌株在饲料、酿造或食品领域中的应用。
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