[发明专利]一种生物肽修饰的仿生型多功能脂蛋白纳米粒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种生物肽修饰的仿生型多功能脂蛋白纳米粒及其制备方法和应用，所述多功能仿生型脂蛋白纳米粒是由生物肽修饰的脂蛋白仿生纳米载体外壳和纳米形式的药物内核组成，所述载体外壳由载脂蛋白仿生肽、生物肽与天然磷脂替代物共同构成。其制备方法包括薄膜分散法和乳化蒸发法。本发明制备方法条件简单温和、成本低廉，制得的生物肽修饰的仿生型多功能脂蛋白纳米粒具有高载药能力、高度仿生型、强穿透性、生物安全性、病变部位靶向性和载药模式多样性等优点。该纳米药物递送平台能够实现“诊疗一体化”以及“多模式联合治疗”，能够实现对于复杂的进行性疾病例如肿瘤、神经退行性疾病等的及时诊断以及高效治疗。

技术领域

本发明属于纳米制剂技术领域，具体涉及一种生物肽修饰的仿生型多功能脂蛋白纳米粒及其制备方法和应用法。

背景技术

脂蛋白是一类由富含固醇脂、甘油三酯的疏水性内核和由载脂蛋白、磷脂、胆固醇等组成的外壳构成的球状微粒，对于体内脂质转运过程起着重要的作用。根据密度不同，脂蛋白可分为4类，包括乳糜微粒(Chylomicrons，CM)、极低密度脂蛋白(Very low-densitylipoprotein，VLDL)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein，LDL)以及高密度脂蛋白(High-density lipoprotein，HDL)。载脂蛋白是脂蛋白中的重要组成成分，主要包括A、B、C、D、E五类。载脂蛋白A族(ApoA)是HDL中主要的载脂蛋白成分，其中ApoA-I为ApoA的主要亚型。由于脂蛋白具有一个疏水性质的脂质内核，且LDL和HDL能够凭借载脂蛋白组分被特定组织表达的受体特异性识别穿透组织并进入细胞中，因此如果将脂蛋白内核中的脂质替换为疏水性性质的药物，那么就可以在不改变脂蛋白完整性的情况下将药物递送到特定部位，例如受体高表达的病灶部位。研究表明脂蛋白脂核中的脂质能够被疏水性药物取代，且不会影响其细胞的受体识别特性。但是在不断研究中发现，直接提取人源性脂蛋白进行脂质的替换成本较高，提取难度大，且不易储存。因此人们逐渐选择某些成分明确的化合物代替脂蛋白颗粒中对应组分形成“合成型脂蛋白颗粒”，例如用胆甾烯基亚油酸酯替换合成LDL的胆固醇酯核心；用DMPC或DOPE代替磷脂制备得两亲性外壳等等。Masuelier等在上世纪80年代报道了采用LDL与疏水化合物结合制备重组纳米粒；Lacko等通过体外重组将紫杉醇(PTX)载入重组高密度脂蛋白(rHDL)形成rHDL-PTX纳米粒，该纳米粒能够与癌细胞有效有效结合，使药物化疗过程中的毒副作用显著降低。但是脂蛋白的核心成分——载脂蛋白仍存在部分问题，包括不易提取、难以获得；合成时间较长、操作繁琐复杂；纯化过程耗时费力、存储成本较高，严重制约了大批量脂蛋白颗粒的开发与应用。为了克服这一难题，研究者根据载脂蛋白的结构与功能特点，开发出与原生载脂蛋白具有极高生物学相似度且几乎完整保留生物学功能的肽段，称之为“载脂蛋白仿生肽”。这种仿生肽的最大优势在于，在基本完整保留原生载脂蛋白功能及性质的基础上，能够克服其在生产、加工、保留过程中存在的种种问题，且与全长的原生载脂蛋白相比，仿生肽的分子量更小，更易于合成与使用，同时由于生产过程全程可控，因此具有更高的安全性。研究表明载脂蛋白仿生肽能够与天然磷脂的替代物重新组装形成“仿生型脂蛋白颗粒”，不仅能够完全保留原生脂蛋白亲水性—疏水性结构以及受体特异性识别、内吞的生物过程，具有极高的生物相容性以及生物安全性，能够被完全降解；同时，能够实现多模式药物负载，例如：①通过范德华力等弱相互作用的非共价键作用力，将药物嵌入脂蛋白表面；②通过共价修饰，将治疗药物或肽与磷脂或载脂蛋白缀合；③疏水药物直接封装于内核当中。虽然有关仿生型制脂蛋白纳米粒的研究以见文献和专利报道，但是如何制备稳定性更高鲜有报道。且单一的仿生型脂蛋白纳米粒靶向性以及特定病灶部位的穿透力与累积性仍较为有限。