[发明专利]表达α1α2结构域缺失的HLA-G异构体标准蛋白的细胞株及其应用

说明书

本发明提供了表达α1α2结构域缺失的HLA‑G异构体标准蛋白的细胞株及其应用，所述细胞株的保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C202047。所述细胞株能表达α1α2结构域缺失的HLA‑G异构体标准蛋白，能作为在流式细胞术、免疫印迹、组织及细胞免疫组化、HLA‑G异构体功能研究及特异性抗体开发筛选的标准参照物。

技术领域

本发明属于生物工程领域，特别涉及胞外α1结构域缺失及α1α2结构域缺失的新型HLA-G异构体HLA-G-Δα1及HLA-G-Δα1α2表达载体构建及稳定表达的细胞株，可作为特定HLA-G异构体分子HLA-G-Δα1及HLA-G-Δα1α2流式细胞术、免疫印迹、组织及细胞免疫组化、HLA-G异构体功能研究及特异性抗体开发筛选的标准参照物等应用。

背景技术

人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因由Geraghty等于1987年发现并克隆。HLA-G分子于1990年首次发现表达于母胎界面的绒毛外滋养层细胞，并于1998年首次在黑色素瘤肿瘤组织和细胞中观察到HLA-G的表达。功能研究显示，HLA-G分子能够通过多种机制调节免疫细胞的生物学功能，HLA-G分子既能直接抑制机体免疫效应细胞的免疫学功能，又能通过诱导产生调节性细胞等机制参与机体的免疫调节过程，是机体内一个重要的免疫耐受分子。HLA-G分子可通过免疫细胞表达的受体，发挥多种重要的免疫调节功能，尤其是与免疫抑制性受体免疫球蛋白样转录物-2(immunoglobulin-liketranscript-2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白样转录物-4(ILT4/LILRB2/CD85d)结合，传递抑制性信号，诱导T细胞、B细胞、NK细胞和DC等免疫细胞发生广泛的免疫抑制作用，并促进MDSCs、DC-10和M2巨噬细胞等免疫调节细胞的生成。此外，HLA-G依赖的抑制性T细胞可分泌TGF-β、IL-10等细胞因子，发挥免疫抑制的功能；HLA-G依赖的致耐受性DC通过ILT4受体诱使CD4+T细胞分化成CD4+CD25+T细胞，高表达CTLA4或Foxp3及分泌IL-10细胞因子。因此，HLA-G分子是机体内一个重要的免疫耐受分子，参与母胎耐受的维持和肿瘤细胞的免疫逃逸等生理、病理过程中起重要作用。

HLA-G编码基因全长6.0kb，由8个外显子和7个内含子组成，位于人类第6号染色体短臂远侧6p21.3。在蛋白质翻译过程中，HLA-G mRNA第1外显子编码信号肽，第2、3和第4外显子分别编码细胞外区的α1、α2和α3结构域，第5位外显子编码跨膜区；第6外显子编码仅含6个氨基酸残基的HLA-G分子胞内段；由于第6外显子内含有终止密码子，第7、第8外显子不被转录。HLA-G mRNA经选择性剪接，至少可以产生7种成熟mRNA，分别编码7种不同异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)。HLA-G1是由全长HLA-G mRNA编码，结构上类似于HLA Ia抗原分子。HLA-G2缺乏α2结构域；HLA-G3缺乏α2和α3结构域；HLA-G4缺乏α3结构域；HLA-G5及HLA-G6胞外区结构域分别与HLA-G1及HLA-G2相同，但它们由含有内含子4的HLA-G mRNA编码，因内含子4中含有终止密码子，所编码的蛋白分子缺乏由外显子5所编码的跨膜区，形成可溶性HLA-G分子。编码HLA-G7的mRNA由于内含子2中含有终止密码子，胞外区仅含α1结构域及由内含子2所编码的2个氨基酸残基相连。HLA-G1～-G7异构体分子的分子量分别为39kD、31kD、23kD、30kD、37kD、27kD及16kD。