[发明专利]一种结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1808及其表位肽的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1808及其表位肽的应用。由所述Rv1808蛋白及其表位肽制备的检测试剂可广泛用于结核病的辅助诊断、流行病学监测等相关领域，Rv1808蛋白及其表位肽制备的结核疫苗和抗结核药物可用于结核病的预防和治疗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1808及其表位肽的应用。

背景技术

结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis，MTB)感染引起的以呼吸道传染为主的传染病，是单因致病率最高的慢性传染性疾病。据WHO估计，全世界约有三分之一人口为结核带菌者，其中约5-10％的携带者可发展为活动性结核病。中国作为全球结核病高负担国之一，肺结核病人的数量仅次于印度而位居世界第二。因此，研发适合中国人群的结核病疫苗和新型检测方法刻不容缓。

结核分枝杆菌属于胞内寄生菌，对其有效控制主要依赖于细胞免疫，其中CD8⁺细胞毒性T细胞(CTL)在清除结核菌中发挥着重要作用。抗原特异性CD8⁺CTL数量的多少和功能的强弱直接反映了人体特异性细胞免疫的功能状态，在监测疾病进程、指导治疗方案、评价临床疗效、预测疾病慢性转归以及疫苗效果评估等方面都有着不同于抗体的重要参考价值。鉴于CD8⁺T细胞在抗结核中发挥的重要作用，筛选中国人群高频HLA分型对应的CTL表位肽及其组合，并定期评估CTL表位肽刺激机体产生抗结核特异性CD8⁺T细胞的数目及功能的动态变化，在结核疫苗研制及后期疗效评估、疾病进展检测中均具有重要的意义。

目前已知的结核菌CTL表位肽主要是在欧美人群中鉴定，多为HLA-A*0201限制性，而对于结核病流行最严重的非洲和东南亚人群，并没有合适的表位肽可使用。HLA-A*2402是世界上分布最广泛的HLA抗原之一，特别在亚洲人群中；然而，已发现的HLA-A*2402特异的结核菌CD8细胞表位非常少。因此，鉴定HLA-A*2402限制性CTL表位对于研发适合中国人群的表位肽疫苗具有非常重要的意义。

发明内容

一方面，本申请提供了结核分枝杆菌Rv1808蛋白在制备结核测试剂、疫苗和/或药物中的应用。

结核分枝杆菌RV1808基因编码的PPE家族蛋白32(PPE32)蛋白属于PPE_SVP亚家族成员之一。

在一些实施方案中，所述Rv1808蛋白选自SEQ ID NO：5所示的序列，或将SEQ IDNO：5所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与SEQID NO：5所示的序列具有相同功能的蛋白质。

一方面，本申请提供了一种结核分枝杆菌的表位肽，所述表位肽选自如SEQ IDNO：1-4任一所示的序列，或将SEQ ID NO：1-4任一所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与取代和/或缺失和/或添加前的序列具有相同功能的表位肽中的至少一种。

T细胞无法识别完整的结核菌和蛋白抗原，而是识别经过抗原递呈细胞摄取和加工后释放出的结核表位肽。表位肽是抗原中引起免疫应答的核心部份，也称为抗原决定簇，它与抗原递呈细胞(APC)表面的MHC分子结合形成肽-MHC复合物并被递呈在APC细胞表面，进而活化T细胞，诱发T细胞免疫反应。CD4⁺T细胞识别MHC-II类分子递呈的表位肽，而CD8⁺T细胞识别MHC-I类分子递呈的表位肽。T细胞对表位肽的识别及其活化要求表位肽与抗原递呈细胞表面MHC分子稳定结合，而肽与MHC分子的亲和力是形成肽-MHC复合物的关键。

在一些实施方案中，所述表位肽选自如SEQ ID NO：1所示的序列，或将SEQ ID NO：1所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与SEQ IDNO：1所示的序列具有相同功能的表位肽。