[发明专利]一种定量检测Lp-PLA2含量的试剂盒

说明书

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种定量检测Lp‑PLA2含量的试剂盒。该试剂盒包括磁微粒混悬液、样品稀释液、酶结合物、校准品；样品稀释液的配方为：牛血清白蛋白10～30g、Proclin300 0.1～10mL、Bronidox0.01～10g、CHAPS 1～20g、Tris‑NaCl缓冲液1L。本发明制备的试剂盒将化学发光技术与磁微粒技术相结合，具有灵敏度高、特异性强、准确性好、高通量等优点，适用于半自动或全自动检测系统，具有较高的使用价值，适于推广应用。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种定量检测Lp-PLA2含量的试剂盒。

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2)是磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2)超家族中的一员，由441个氨基酸残基组成，相对分子量为45.4kD。PLA2是一类能水解磷脂甘油支架Sn-2位上的短链酰基的酶族。根据存在的部位、底物特异性、辅助因子的需求和生理学作用等，PLA2主要分为分泌型(sPLA2)、胞质型(cPLA2)和非钙离子依赖型(iPLA2)、血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)、溶酶体型和脂肪特异型6种。Lp-PLA2属于血小板活化因子乙酰水解酶，不需要钙离子维持其催化活性，是丝氨酸依赖的磷脂酶，主要作用于氧化磷脂而不是在Sn-2带有长链脂肪酸的未氧化磷脂。Lp-PLA2主要由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，人循环中的Lp-PLA2以与脂蛋白颗粒结合的形式存在，其中2/3与LDL结合，1/3与HDL、VLDL结合。Lp-PLA2作为一种新的炎性反应标志物，在动脉粥样硬化的几个主要阶段中均起作用。

Lp-PLA2的测定方法很多，主要分为两大类：酶法和质量法。酶法生化平台检测血清/血浆中Lp-PLA2的酶活性；质量法检测血清/血浆中Lp-PLA2的含量。目前检测方法有影像学检查方法、生化检查方法、免疫学检查方法，免疫学检查方法包括发光免疫测定、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金层析法等。现有进行Lp-PLA2的检测方法，各有优缺点，具体描述如下：

影像学检查：冠状动脉造影及血管内成像技术是目前冠状动脉粥样硬化疾病诊断的“金标准”，可以明确冠状动脉有无狭窄、狭窄的部位、程度、范围等，并可据此指导进一步治疗。但是血管造影对患者有一定的创伤，存在患者不愿使用该方法，并且有部分患者不适合进行该检查(对造影剂过敏等)，因此影响学检查的应用存在一定的局限性。

生化检查：目前进行生化检查主要是测定酶活。适用于全自动生化分析仪，能高通量检测，且定量准确，批间批内差小，重复性好。但是易受环境干扰。

免疫学检查：免疫学检查利用抗原抗体特异性反应。主要检查方法有化学发光法、ELISA、胶体金、层析法等。其中化学发光以上转发光免疫分析为代表，具有操作简单、结果稳定、重复性好等特点，但是通量小。ELISA操作略显复杂，影响因素多，但作为高通量检测，可满足大样本检测需求。胶体金、免疫层析法标本用量少，简便快速，适合于Lp-PLA2的床边检测。但是对于定量测定则灵敏度很差。

基于上述检测方法的不足之处，有必要提供一种自动化程度高、通量大，并且在灵敏度、特异性、准确性上符合临床需求的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种定量检测Lp-PLA2含量的试剂盒。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确性好、高通量等优点，适用于半自动或全自动检测系统，具有较高的使用价值，适于推广应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种定量检测Lp-PLA2含量的试剂盒，包括磁微粒混悬液、样品稀释液、酶结合物、校准品；

样品稀释液的配方为：牛血清白蛋白10～30g、Proclin300 0.1～10mL、Bronidox0.01～10g、CHAPS 1～20g、Tris-NaCl缓冲液1L；