[发明专利]一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用

说明书

本发明公开了一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用。所述脂质混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、维生素E醋酸酯和聚醚F‑68；所述脂质混合物用于培养T细胞的无血清培养基中；所述无血清培养基包括Lonza X‑VIVO 15supgt;TM/supgt;培养基、Corning 88‑581‑CM DC/CIK细胞无血清培养基、Lonza X‑VIVO 15supgt;TM/supgt;无酚红培养基中的一种，以及其他商品化T细胞无血清培养基。本发明的脂质混合物不仅化学成分明确，而且配方简化，性能优异，加入T细胞无血清培养基中可有效提高T细胞增殖倍数和细胞活率，培养10天可在原商品化无血清培养基基础上将T细胞扩增倍数提高200%以上，将终末细胞活率提高20%以上。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体为一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用。

背景技术

T细胞是淋巴细胞的主要组成之一，具有多种生物学功能，可直接杀伤靶细胞，也可辅助其它淋巴细胞发挥功能，是身体抵御疾病感染、防止肿瘤形成的主要免疫细胞之一。在体外富集、活化、扩增T细胞，可回输治疗多种疾病，包括恶性肿瘤、自身免疫疾病等。在这个过程中，使用安全可靠的无血清培养基对T细胞进行体外扩增，可避免人源、动物源病原体的引入风险，同时避免T细胞扩增体系汇总不明成分可能引起的机体免疫反应，对后续T细胞治疗产品的临床应用非常关键。

T细胞的体外扩增要使用能够促进T细胞快速增殖且保持细胞活率的无血清培养基。而脂肪酸如棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇可用于合成细胞膜，是无血清培养基的重要组分。脂肪酸进入细胞后也可氧化分解成乙酰辅酶A，进入三羧酸循环，为细胞提供大量能量，促进T细胞生长。然而，棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇难溶于水，现有的商业化T细胞无血清培养基往往将脂肪酸和胆固醇直接加到培养基中，这样会导致脂质组分不稳定，难以被细胞吸收。

综上所述，如何提高脂肪酸和胆固醇在水中的溶解度，增加脂质组分的稳定性和吸收率，对于提高T细胞的细胞活率和增殖倍数有关键作用。因此，配制一种用于细胞培养基的脂质混合物具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种用于细胞培养基的脂质混合物，所述脂质混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、维生素E醋酸酯和聚醚F-68。

较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg维生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68。

较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.2mg葡聚糖、0.2mg维生素E醋酸酯、0.2mg聚醚F-68。

较为优化地，所述脂肪酸混合物包括棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇其中一种或四种混合物。

较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.01~0.5mg棕榈酸、0.01~0.5mg棕榈油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg胆固醇。

较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.1mg棕榈酸、0.1mg棕榈油酸、0.1mg硬脂酸和0.1mg胆固醇。

较为优化地，一种用于细胞培养基的脂质混合物的配制方法，包括以下步骤：取注射水加入洁净的烧杯中，依次加入葡聚糖、维生素E醋酸酯、聚醚F-68搅拌均匀；再依次加入棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇继续搅拌均匀；转移至容量瓶中定容，0.2μm过滤器过滤，得到脂质混合物，分装，置于4℃储存。

较为优化地，一种用于细胞培养基的脂质混合物的应用，所述脂质混合物用于培养T细胞的无血清培养基中。