[发明专利]一种表达HPV 53L1的多核苷酸及其表达载体、宿主细胞和应用

权利要求书

1.一种用于编码HPV 53L1蛋白的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQID NO：3所示。

2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中含有如权利要求1所示多核苷酸。

3.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有或者整合有如权利要求2所述重组表达载体。

4.根据权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为酵母；优选的，为甲醇酵母；更优选的，为多形汉逊酵母。

5.一种产生HPV 53L1蛋白的方法，包括以下步骤：构建整合有或者含有核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的多核苷酸的重组汉逊酵母菌，培养，收集菌体，破碎菌体获得裂解液，分离纯化裂解液，即可获得HPV 53L1蛋白。

6.根据权利要求5所述的产生HPV 53L1蛋白的方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：

1)所述多核苷酸整合于质粒中，所述质粒整合于重组汉逊酵母菌种基因组中；

2)所述培养的条件包括：pH5.0～7.0，发酵温度30～37℃，搅拌转速≦950rpm，空气流量≦2.0VVM，罐压≦0.10MPa，溶氧10％以上；

3)将重组汉逊酵母菌种置于含有甘油的培养基中培养；在培养过程中，当培养基中的甘油消耗完，菌体湿重大于100g/L时，开始加甘油，甘油补料速度200～600g/h；当菌体湿重大于200g/L时，开始一次性加入甲醇至0.5％(w/v)，进入甲醇诱导期，待甲醇全部消耗且溶氧上升到80％时，开始流加甲醇，随着菌体利用甲醇速度加快，逐步调整甲醇流加速度，诱导过程控制溶氧20％以上，诱导30～50h菌体湿重达到300～400g/L后发酵结束；

4)所述分离纯化是指将菌体裂解液先通过阳离子交换层析，再通过CHT层析。

7.一种HPV 53L1蛋白，采用权利要求5-6任一所述的产生HPV 53L1蛋白的方法获得。

8.如权利要求1所述的用于编码HPV 53L1蛋白的多核苷酸，或权利要求2所述的重组表达载体，或权利要求3所述的宿主细胞，或权利要求7所述的HPV 53L1蛋白在制备HPV疫苗中的用途。

9.一种抗HPV疫苗的制备方法，包括以下步骤：利用权利要求5-6任一所述的产生HPV53L1蛋白的方法，制备HPV 53L1蛋白，加入药学上可用的疫苗佐剂。

10.一种抗HPV的疫苗，采用权利要求9所述的抗HPV疫苗的制备方法获得。