[发明专利]一种二维高压制备液相色谱系统及药物中低含量的目标组分的分离纯化方法

说明书

本申请涉及制备液相色谱分离的技术领域，具体公开了一种二维高压制备液相色谱系统及药物中低含量的目标组分的分离纯化方法。系统包括第一维高压制备液相色谱系统、二位六通切换阀、多位选择阀、捕集柱和第二维高压制备液相色谱系统；第二维高压制备液相色谱系统包括第二混合器和二维分离柱；第一维高压制备液相色谱系统和二位六通切换阀、多位选择阀、捕集柱依次连通，捕集柱的出口端和二位六通切换阀再次连通；第二混合器和二位六通切换阀、二维分离柱依次连通。所述方法为：自一维系统检测样品后捕集目标组分至捕集柱；切换二位六通切换阀，反冲洗出被捕集组分并做二维检测。本申请的方法具有高效分离纯化药物中含量极低的杂质成分的优点。

技术领域

本申请涉及医药技术和制备液相色谱分离的技术领域，更具体地说，它涉及一种二维高压制备液相色谱系统及药物中低含量的目标组分的分离纯化方法。

背景技术

任何影响药物纯度的物质统称为杂质，杂质的研究是药品研发的一项重要内容，与药物生产、安全性及效能密切相关，是药物的关键质量属性之一。美国药典(USP)和欧洲药典(EP)中明确规定：药物在临床使用前必须对表观含量≥0.1％的杂质进行结构确证，表观含量在0.1％以下的具有强烈生物作用的杂质、毒性杂质以及在稳定性试验中出现的降解产物，均应予以定性测定或确证其结构。我国从2005年颁布《中华人民共和国药典》开始，也出台了关于药物杂质研究的相关指导原则。在药物杂质的研究中，最重要的环节是对其进行正确的结构确证，而对其进行结构确证的前提条件是在复杂的药物杂质中对其进行分离和纯化，得到足够量的样品进行结构鉴定。由于大多数杂质在药物中的含量极低，且存在化学性质不稳定、见光易分解、受热易变性等特点，导致在对该类杂质进行分离纯化的过程中会遇到很多困难。

制备型高压液相色谱由于具有高流速、高分离度、载样量大及分离时间短等优点，近些年来，在天然产物的分离和纯化中得到了广泛的应用。由于药物生产中出现的杂质，大多数与其原料药具有相似的结构，因此难以分离纯化。但是，一般在鉴定药物中杂质的化学结构时，往往要求待测杂质经分离纯化后达到一定的纯度，才能在样品杂质的结构鉴定中得到准确的鉴定结果。因此，当待测杂质难以经一次分离纯化达到鉴定所需的纯度要求时，便需要反复多次进行分离纯化，这样就会导致待测杂质的含量越来越少。同时每次回收待测杂质的过程中也存在待测杂质不稳定而发生化学变化的问题，最后虽然待测杂质的纯度达到要求，但是待测杂质的总量过低，最终无法进行结构鉴定。

基于上述原因，开发一种新型，高效的色谱分离纯化系统就显得十分必要。

其中，二维制备液相色谱是近年来发展起来的一种新的色谱分离手段，它能将在第一维色谱上没能完全分离开的多种不同组分或者是微量成分(某组分含量过少时，其在色谱中的谱峰会被其他组分的谱峰遮掩而显示不出来该微量组分的谱峰)，通过特定装置进行收集和保留，然后在第二维色谱进行再次分离纯化；目前该方法在蛋白质和多肽等大分子化合物的分离纯化中得到了广泛的应用。由于该手段避免了样品多次分离纯化导致的各种风险，同时提高了分离效率，缩短分离时间，节约了生产成本，使其可以在药物杂质的分离纯化中也能得到很好的应用。

相关技术中主要通过三通阀将第一维色谱单元与第二维色谱单元联通，而三通阀有两种工作状态，一种工作状态下，第一维色谱单元的出样端直接与检测单元连通；在另一种工作状态下，第一维色谱的出样端通过三通阀直接与第二维色谱的进样端连通。该方法适用于含量大，分离度好的组分的分离纯化，对微量成分没有富集和纯化作用，因而无法对该类物质进行有效的分离纯化。

另有相关技术提供的是一种在线将低、中、高压结合的二维制备液相色谱系统：第一维分离系统与第二维分离系统通过六通阀进行连接；第一维分离系统使用低或中压制备液相色谱系统，第二维分离系统使用低、中、高压制备液相色谱系统；且第二维分离系统使用的压力不低于第一维分离系统。但是第一维分离系统使用低压或者中压制备液相色谱系统对复杂样品的分离度，达不到分离效果，最终无法实现对复杂样品的低含量的目标组分的有效分离纯化。

发明内容