[发明专利]一种超滤器及分离外泌体的方法

说明书

本发明公开了一种超滤器及分离外泌体的方法，涉及分离提纯技术领域。其包括储液容器，储液容器开设有进气口和进液口，进气口连接有空气过滤器，储液容器的出液端依次设置有除菌滤膜和超滤膜，且除菌滤膜与储液容器的底部互相配合密封连接，超滤膜的底部连通滤液出口。采用本发明中的超滤器对外泌体上清过滤后，可以保证外泌体膜和囊泡内的生物活性，获得完整性较高的外泌体。该方法避免了提纯浓缩过程中对于留在浓缩液中外泌体的破坏，保证了生物大分子的活性，有效避免了细菌污染问题的发生。该分离方法简单易行、成本低廉，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及分离提纯技术领域，具体而言，涉及一种超滤器及分离外泌体的方法。

背景技术

外泌体(exosomes)是动物组织细胞形成并释放到外周血液和体液中的大小为40～150nm的扁盘状细胞外囊泡。外泌体包裹了大量的核酸、蛋白质、脂肪等信息物质,而这些信息物质在细胞间的信息传递中发挥了重要作用并调控动物一些重要的生理活动，因此，对外泌体的研究一直备受关注。2013年,James Rothman、Randy Schekman和Thomas Südof3位科学家因发现了细胞内囊泡运输的调控机制获得了诺贝尔生理学或医学奖,而后国内外每年发表外泌体相关文章多达1500篇。

目前的研究多集中于外泌体的形成与功能以及外泌体在免疫调节中的作用，以期为利用外泌体开发肿瘤早期诊断、免疫治疗和动物疾病控制的新途径、新方法。新的研究发现外泌体具有发挥组织损伤修复和再生功能，可以起到抗衰老和保健作用，具有良好的美容作用。其中，脐带间充质干细胞的外泌体在实际应用中具有如下优势：来源易得，来源于新生儿脐带；脐带间充质干细胞分离培养技术很成熟，并有市售的专用于脐带间充质干细胞的商品培养基；在抗衰老、美容的应用效果较好。

目前，外泌体分离纯化方法有：超速离心法、蔗糖密度梯度离心法、商品化试剂盒沉淀法、聚合物沉淀法、超滤法、免疫磁珠法和微流控芯片法。

各类外泌体分离方法优缺点比较

综合目前的分离方法，尚无一种分离方法能够满足大批量样本分离需求，分离方法存在其他物质污染影响下游分析，且分离方法存在破坏外泌体结构或功能的缺陷，存在分离成本高的问题。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种超滤器及分离外泌体的方法以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种超滤器，其包括储液容器，储液容器开设有进气口和进液口，进气口连接有空气过滤器，储液容器的出液端依次设置有除菌滤膜和超滤膜，且除菌滤膜与储液容器的底部互相配合密封连接，超滤膜的底部连通滤液出口。

外泌体和生物大分子的活性成分受到光、热、高压都容易降低其生物活性，所以保持时一般要求避光、低温(2-25℃)、密封，而外泌体上清是细胞培养的上清液，里面成分复杂，大的杂质有细胞、细胞碎片以及培养过程中的各种大分子交缠一起絮状物，小的杂质有：培养基里的各种盐、氨基酸、核酸、维生素、微量元素等成分，浓缩纯化的目的是尽可能留下外泌体和生物大分子，去掉没有功能甚至有害的大小杂质。

发明人发现影响外泌体分离方法处理量小，外泌体易受外界环境污染的原因在于，超滤膜无法高压湿热消毒灭菌，而现有的分离设备使用超滤膜进行过滤外泌体上清液时，容易造成外泌体上清液细菌污染的问题。另外，现有的过滤设备在对外泌体上清液进行过滤时，由于过滤时间较长(24h以上)，过滤设备内用于盛放待分离外泌体的外泌体上清液极易长菌，外泌体上清存放时间极为有限，分离效率低下。