[发明专利]抗CK7蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人CK7抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取CK7蛋白C末端和N末端的8组氨基酸肽段(1‑16、74‑86、139‑150、324‑335、347‑357、401‑410、421‑434、444‑469位点)串联，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21(DE3)表达的CK7重组肽段，最后得到的重组蛋白包含GST蛋白标签、CK7重组肽段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗CK7蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株25C4,以及由该细胞株所分泌的抗CK7蛋白单克隆抗体。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗CK7蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

CK是一类水溶性的、由细胞角蛋白基因编码的多肽链。它作为细胞骨架蛋白的一部分，是最复杂的中间丝蛋白。维持上皮组织的连续性和完整性是细胞角蛋白的的主要生物学功能。目前已经被证实了的细胞角蛋白多达20余种。根据不同的酸碱性，可将细胞角蛋白进一步分为Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型细胞角蛋白偏酸性，相对分子质量偏小，主要包括CK9～CK20；Ⅱ型细胞角蛋白偏碱性，相对分子质量较大，主要包括CK1～CK8。在不同的上皮组织中，其所表达的细胞角蛋白亚型也不同。细胞角蛋白在上皮细胞中的表达受细胞分化程度的调节，不同来源的上皮细胞，其表达的细胞角蛋白亚型往往不同。当正常的上皮细胞发生恶性变时，其所表达的细胞角蛋白不会发生变化。这一特性有助于鉴别肿瘤组织来源，对上皮性肿瘤进行准确分类。目前，越来越多的肿瘤标记物被用于肿瘤微转移的检测。

CK7是CK家族中的一种偏碱性的蛋白，相对分子质量大约是54 000，属于低分子质量蛋白，其编码基因位于人类的第12号染色体上。它主要表达于腺上皮及移行上皮中，可以定位于细胞质、线粒体及细胞核中。在细胞质内CK7通过联合其他辅助蛋白一起形成复杂的网络系统，维持着上皮细胞的形态完整性及连续性。CK7所在的上皮性肿瘤中及其转移灶中仍然保留其在正常组织中的表达模式，因而在肿瘤的免疫组化鉴别诊断、肿瘤的转移、浸润和分类以及亚型确定等方面有着重要作用。大多数的腺癌组织CK7表达阳性，据报道，其在肺腺癌中的表达率为96％、胰腺癌中为95％、乳腺导管癌中为86％、乳腺小叶癌为95％。CK7是上皮源性肿瘤细胞标记物，在淋巴结、血液等间叶组织中则不表达。当CK7在淋巴结等组织中表达时，可认为存在肿瘤的微转移。

发明内容

发明人提供了一种抗CK7蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO.5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别CK7蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG_2a亚型单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO 20776的杂交瘤细胞株产生。

发明人又提供了一种抗CK7蛋白单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含GST蛋白标签、CK7重组肽段及组氨酸蛋白标签；所述CK7重组肽段的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

发明人还提供了一株分泌抗CK7蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株25C4，所述细胞株已于2020年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO 20776，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

发明人还提供了上述单克隆抗体在CK7蛋白免疫检测中的用途。