[发明专利]靶向M细胞的多表位口服疫苗及其在包虫疫苗中的应用

说明书

本发明属于疫苗技术领域，具体公开了靶向M细胞的多表位口服疫苗,包括载体、M细胞的靶向肽Co1、特异性针对犬DLA限制性位点的CD4⁺T细胞表位肽，特异性针对犬DLA限制性位点的CD4⁺T细胞表位肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。本发明还公开了上述靶向M细胞的多表位口服疫苗在包虫疫苗中的应用。本发明提供的靶向M细胞的多表位口服疫苗有效降低小鼠体内包虫包囊，生产方便，不受免疫操作人员限制。

技术领域

本发明属于疫苗技术领域，尤其涉及靶向M细胞的多表位口服疫苗及其在包虫疫苗中的应用。

背景技术

包虫病(cystic echinococcosis；CE)又称棘球蚴病，是细粒棘球绦虫(Echinococcusgranulosus；Eg)的幼虫棘球蚴寄生于人体及某些动物的肝、肺等脏器所致的一种严重的人畜共患慢性寄生虫疾病。目前，治疗时，疫苗预防是防止包虫病流行的有效措施。

鉴于新疆地区包虫病高发，严重危害牧民健康，又缺乏有效的保护性疫苗的背景，发明人曾作出以下探索：(1)从细粒棘球蚴中克隆EgG1Y162抗原基因，发现无论在基因序列上，还是在氨基酸序列、蛋白结构上，EgG1Y162抗原基因均与国外研究者已研发的用于终末宿主保护的候选疫苗具有高度的相似性，很可能也是终末宿主的保护性抗原；(2)在2009年申请的申请公开号为CN101475938A的中国发明专利申请公开了一种包虫病抗原基因即EgG1Y162抗原基因及其重组蛋白和应用；(3)在2013年申请的申请公开号为CN103041382A的中国发明专利申请公开了一种细粒棘球蚴重组BCG疫苗及制备方法。

在前述研究的基础上，发明人发现，基于EgG1Y162抗原基因的注射疫苗具有生产技术限制和对实施免疫操作人员的限制，希望寻求一种能够有效降低包虫包囊，生产工艺简单，可以口服的包虫病疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够有效降低小鼠体内包虫包囊，生产工艺简单，不受免疫操作人员限制的靶向M细胞的多表位口服疫苗及其在包虫疫苗中的应用。

为了达到上述目的，本发明提供一种靶向M细胞的多表位口服疫苗，包括载体、M细胞的靶向肽Co1、特异性针对犬DLA限制性位点的CD4⁺T细胞表位肽，特异性针对犬DLA限制性位点的CD4+T细胞表位肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。

本发明还公开了上述靶向M细胞的多表位口服疫苗的制备方法，包括以下步骤：

S1、获取特异性针对犬DLA限制性位点的CD4⁺T细胞表位肽：获取EgG1Y162抗原的cDNA序列、犬DLA限制性位点DLA-DRB1*011:01蛋白和犬DLA限制性位点DLA-DRB1*015:01蛋白的氨基酸序列，确定特异性针对犬DLA限制性位点的CD4⁺T细胞表位肽；

S2、获取Co1-Multi-EgG1Y162：将特异性针对犬DLA限制性位点的CD4⁺T细胞表位肽和M细胞的靶向肽Co1通过linker连接，得到Co1-Multi-EgG1Y162；

S3、构建pcDNA3.1-Co1-Multi-EgG1Y162真核表达系统；

S4、获得pcDNA3.1-Co1-Multi-EgG1Y162蛋白；